Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za izradu svijeća i sapuna veleprodaja difuzora eterično ulje novo za difuzore plamenika od trske
kratki opis:
2.1. Priprema SDE
Rizomi SD-a kupljeni su kao osušena biljka od Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljne materijale taksonomski je potvrdio dr. Go-Ya Choi s Korejskog instituta za istočnjačku medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) pohranjen je u Korejski herbarij standardnih biljnih izvora. Osušeni rizomi SD (320 g) ekstrahirani su dva puta sa 70% etanolom (uz 2 h refluksa) i ekstrakt je zatim koncentriran pod sniženim tlakom. Uvarak je filtriran, liofiliziran i pohranjen na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih početnih materijala bio je 48,13% (w/w).
2.2. Kvantitativna analiza tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti (HPLC).
Kromatografska analiza provedena je s HPLC sustavom (Waters Co., Milford, MA, SAD) i fotodiodnim detektorom s nizom. Za HPLC analizu SDE, prim.O- standard glukozilcimifugina kupljen je od Korejskog instituta za promociju tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja), isekund-O-glukozilhamaudol i 4'-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol izolirani su u našem laboratoriju i identificirani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.
SDE uzorci (0,1 mg) otopljeni su u 70% etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje provedeno je s XSelect HSS T3 C18 kolonom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza sastojala se od acetonitrila (A) i 0,1% octene kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je program gradijenta u više koraka kako slijedi: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min) i 20-65% A (23-40 min.) ). Valna duljina detekcije je skenirana na 210-400 nm i zabilježena na 254 nm. Volumen injekcije bio je 10,0μL. Standardne otopine za određivanje triju kromona pripremljene su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim.O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol), i 31,125 mg/mL (sekund-O-glukozilhamaudol) u metanolu i držan na 4°C.
2.3. Procjena protuupalnog djelovanjaIn Vitro
2.3.1. Kultura stanica i obrada uzorka
Stanice RAW 264.7 dobivene su iz American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) i uzgojene u DMEM mediju koji je sadržavao 1% antibiotika i 5,5% FBS. Stanice su inkubirane u vlažnoj atmosferi s 5% CO2 na 37°C. Za stimulaciju stanica, medij je zamijenjen svježim DMEM medijem i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SAD) na 1μg/mL je dodan u prisutnosti ili odsutnosti SDE (200 ili 400μg/mL) dodatnih 24 h.
2.3.2. Određivanje dušikovog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora nekroze tumora-α(TNF-α), i proizvodnja interleukina-6 (IL-6).
Stanice su tretirane sa SDE i stimulirane sa LPS 24 sata. Proizvodnja NO analizirana je mjerenjem nitrita pomoću Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Izlučivanje upalnih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen korištenjem ELISA kompleta (R&D sustavi) prema uputama proizvođača. Učinci SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm pomoću Wallac EnVision™čitač mikropločica (PerkinElmer).
2.4. Procjena aktivnosti antiosteoartritisaIn Vivo
2.4.1. Životinje
Muški štakori Sprague-Dawley (stari 7 tjedana) kupljeni su od Samtako Inc. (Osan, Koreja) i držani u kontroliranim uvjetima s 12-satnim ciklusom svjetlo/tama na°C i% vlažnosti. Štakori su dobili laboratorijsku hranu i voduad libitum. Svi eksperimentalni postupci provedeni su u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobreni od strane Odbora za brigu i korištenje životinja Sveučilišta Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).
2.4.2. Indukcija OA s MIA u štakora
Životinje su randomizirane i raspoređene u skupine za liječenje prije početka studije (po grupi). MIA otopina (3 mg/50μ1 0,9% fiziološke otopine) izravno je ubrizgan u intraartikularni prostor desnog koljena pod anestezijom induciranom mješavinom ketamina i ksilazina. Štakori su nasumično podijeljeni u četiri skupine: (1) skupina s fiziološkom otopinom bez injekcije MIA, (2) skupina s MIA s injekcijom MIA, (3) skupina liječena SDE (200 mg/kg) s injekcijom MIA i (4 ) skupina tretirana indometacinom (IM-) (2 mg/kg) s MIA injekcijom. Štakorima su davani oralno SDE i IM 1 tjedan prije MIA injekcije tijekom 4 tjedna. Doziranje SDE i IM korišteno u ovoj studiji temeljilo se na onima korištenim u prethodnim studijama [10,13,14].
2.4.3. Mjerenja raspodjele težine stražnje šape
Nakon indukcije OA, izvorna ravnoteža u sposobnosti nošenja težine stražnjih šapa bila je poremećena. Ispitivač nesposobnosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK) korišten je za procjenu promjena u toleranciji nošenja težine. Štakori su pažljivo stavljeni u mjernu komoru. Sila nošenja težine koju vrše stražnji ekstremiteti je prosječna tijekom razdoblja od 3 s. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednadžbom: [težina na desnom stražnjem ekstremitetu/(težina na desnom stražnjem ekstremitetu + težina na lijevom stražnjem ekstremitetu)] × 100 [15].
2.4.4. Mjerenja razine citokina u serumu
Uzorci krvi su centrifugirani na 1500 g tijekom 10 minuta na 4°C; zatim je serum sakupljen i pohranjen na -70°C do upotrebe. Razine IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu izmjereni su pomoću ELISA kitova tvrtke R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.
2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u stvarnom vremenu
Ukupna RNA ekstrahirana je iz tkiva zgloba koljena pomoću TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD), obrnuto transkribirana u cDNA i PCR-amplificirana pomoću TM One Step RT PCR kompleta sa SYBR zelenim (Applied Biosystems , Grand Island, NY, SAD). Kvantitativni PCR u stvarnom vremenu proveden je pomoću sustava Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Sekvence početnica i sekvence sonde prikazane su u tablici1. Alikvoti uzoraka cDNA i jednaka količina GAPDH cDNA umnoženi su TaqMan® Universal PCR glavnom smjesom koja sadrži DNA polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, CA, SAD). Uvjeti PCR bili su 2 minute na 50°C, 10 minuta na 94°C, 15 s na 95°C i 1 minuta na 60°C tijekom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena određena je pomoću usporedne metode Ct (broj ciklusa praga na križnoj točki između dijagrama pojačanja i praga), prema uputama proizvođača.
Osteoartritis (OA) najčešći je poremećaj mišićno-koštanog sustava i najčešća degenerativna bolest zglobova u starijih osoba.1]. OA je stanje djelomično uzrokovano ozljedom, gubitkom strukture i funkcije hrskavice i disregulacijom proupalnih i protuupalnih putova [2,3]. Prvenstveno utječe na zglobnu hrskavicu i subhondralnu kost sinovijalnih zglobova i rezultira otkazivanjem zgloba, što dovodi do boli tijekom nošenja težine, uključujući hodanje i stajanje [4].
Ne postoji lijek za OA, jer je vrlo teško obnoviti hrskavicu nakon što je uništena [5]. Ciljevi liječenja su ublažiti bol, održati ili poboljšati pokretljivost zglobova, povećati snagu zglobova i minimizirati onesposobljavajuće učinke bolesti. Farmakološki tretmani OA imaju za cilj smanjenje boli kako bi se poboljšala funkcija zglobova i kvaliteta života bolesnika. Iako je destrukcija hrskavice glavni događaj u OA, degradacija kolagena temeljni je događaj koji određuje nepovratnu progresiju OA u vezi s upalom [6,7]. Očekuje se da će tretmani s protuupalnim i kondroprotektivnim djelovanjem ublažiti bol i održati cjelovitost matriksa u bolesnika s OA.
Stoga će smanjenje upale vjerojatno biti korisno u liječenju OA. Nedavne studije sugeriraju zaštitnu ulogu biljnih izvora u napredovanju OA, u smislu ublažavanja upale hondrocita i daljnjeg uništavanja hrskavice, kroz njihovu sposobnost interakcije s tkivima povezanim sa zglobovima, što rezultira ublažavanjem bolova u zglobovima [8].
Korijen odSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) naširoko se koristi u tradicionalnoj medicini za liječenje glavobolje, boli, upala i artritisa u Koreji i Kini [9,10]. Različiti farmakološki učinciSaposhnikovia divaricata(SD) također uključuju protuupalna, analgetska, antipiretička i antiartritička svojstva [9,11]. Nedavna studija pokazala je da ekstrakt SD kromona ima potencijalne učinke protiv reumatoidnog artritisa u mišjem modelu artritisa izazvanog kolagenom [10]; međutim, malo je studija provedeno u prilog protuupalnom i antiartritisnom djelovanjuSaposhnikovia divaricataekstrakt (SDE).
Stoga je ova studija istraživala protuupalno i antiosteoartritisno djelovanje 70% etanolnog ekstrakta SD-a. Prvo je procijenjen protuupalni učinak SDEin vitrou stanicama RAW 264.7 izazvanim LPS-om. Zatim je mjeren antiosteoartritisni učinak SDE procjenom raspodjele nosivosti, degradacije zglobne hrskavice i upalnih odgovora u štakorskom modelu OA izazvanog mononatrijevim jodoacetatom (MIA).