Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za izradu svijeća i sapuna, veleprodaja, eterično ulje za difuzore, novo za difuzore s trstičnim plamenikom

kratki opis:

 

2.1. Priprema SDE-a

Rizomi SD-a kupljeni su kao sušena biljka od tvrtke Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljni materijal taksonomski je potvrdio dr. Go-Ya Choi iz Korejskog instituta za orijentalnu medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) pohranjen je u Korejskom herbariju standardnih biljnih resursa. Osušeni rizomi SD-a (320 g) ekstrahirani su dva puta sa 70%-tnim etanolom (uz 2 sata refluksa), a ekstrakt je zatim koncentriran pod smanjenim tlakom. Dekokt je filtriran, liofiliziran i pohranjen na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih početnih materijala bio je 48,13% (w/w).

 

2.2. Kvantitativna analiza visokoučinkovitom tekućinskom kromatografijom (HPLC)

Kromatografska analiza provedena je HPLC sustavom (Waters Co., Milford, MA, SAD) i detektorom s fotodiodnim nizom. Za HPLC analizu SDE-a, primarni...O-glukozilcimifugin standard je kupljen od Korejskog instituta za promociju tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja), isec-O-glukozilhamaudol i 4'-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol su izolirani u našem laboratoriju i identificirani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.

Uzorci SDE (0,1 mg) otopljeni su u 70%-tnom etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje provedeno je s kolonom XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza sastojala se od acetonitrila (A) i 0,1% octene kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je višestupanjski gradijentni program kako slijedi: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min). Valna duljina detekcije skenirana je na 210–400 nm i zabilježena na 254 nm. Volumen ubrizgavanja bio je 10,0μL. Standardne otopine za određivanje tri kromona pripremljene su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4'-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) i 31,125 mg/mL (sec-O-glukozilhamaudol) u metanolu i čuvan na 4°C.

2.3. Evaluacija protuupalnog djelovanjaIn vitro

2.3.1. Stanična kultura i obrada uzoraka

Stanice RAW 264.7 dobivene su iz Američke kolekcije tipskih kultura (ATCC, Manassas, VA, SAD) i uzgojene u DMEM mediju koji sadrži 1% antibiotika i 5,5% FBS-a. Stanice su inkubirane u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 na 37°C. Za stimulaciju stanica, medij je zamijenjen svježim DMEM medijem i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SAD) na 1μg/mL je dodan u prisutnosti ili odsutnosti SDE (200 ili 400μg/mL) tijekom dodatnih 24 sata.

2.3.2. Određivanje dušikovog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora tumorske nekrozeα(TNF-α) i proizvodnju interleukina-6 (IL-6)

Stanice su tretirane SDE-om i stimulirane LPS-om tijekom 24 sata. Produkcija NO analizirana je mjerenjem nitrita pomoću Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Izlučivanje upalnih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen pomoću ELISA kita (R&D systems) prema uputama proizvođača. Učinci SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm pomoću Wallac EnVision uređaja.™čitač mikroploča (PerkinElmer).

2.4. Evaluacija antiosteoartritične aktivnostiIn vivo

2.4.1. Životinje

Mužjaci štakora Sprague-Dawley (stari 7 tjedana) kupljeni su od tvrtke Samtako Inc. (Osan, Koreja) i smješteni u kontroliranim uvjetima s 12-satnim ciklusom svjetla/tame pri°C i% vlažnosti. Štakorima je dana laboratorijska prehrana i vodapo voljiSvi eksperimentalni postupci provedeni su u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobreni od strane Odbora za njegu i korištenje životinja Sveučilišta Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).

2.4.2. Indukcija OA s MIA u štakora

Životinje su randomizirane i raspoređene u skupine za liječenje prije početka studije (po skupini). Otopina MIA (3 mg/50μ1 l 0,9%-tne fiziološke otopine) izravno je ubrizgan u intraartikularni prostor desnog koljena pod anestezijom induciranom smjesom ketamina i ksilazina. Štakori su nasumično podijeljeni u četiri skupine: (1) skupina s fiziološkom otopinom bez injekcije MIA, (2) skupina s MIA injekcijom, (3) skupina tretirana SDE-om (200 mg/kg) s injekcijom MIA i (4) skupina tretirana indometacinom (IM) (2 mg/kg) s injekcijom MIA. Štakorima je oralno davan SDE i IM 1 tjedan prije injekcije MIA tijekom 4 tjedna. Doziranje SDE i IM korišteno u ovoj studiji temeljilo se na onima korištenima u prethodnim studijama [10,13,14].

2.4.3. Mjerenja raspodjele težine stražnjih šapa

Nakon indukcije osteoartritisa (OA), izvorna ravnoteža u sposobnosti nošenja težine stražnjih šapa bila je poremećena. Za procjenu promjena u toleranciji nošenja težine korišten je tester onesposobljenosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK). Štakori su pažljivo smješteni u mjernu komoru. Sila nošenja težine koju vrši stražnji ud usrednjena je tijekom razdoblja od 3 sekunde. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednadžbom: [težina na desnom stražnjem udu / (težina na desnom stražnjem udu + težina na lijevom stražnjem udu)] × 100 [15].

2.4.4. Mjerenja razine citokina u serumu

Uzorci krvi su centrifugirani pri 1500 g tijekom 10 minuta na 4 °C; zatim je serum sakupljen i pohranjen na -70 °C do upotrebe. Razine IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu mjereni su pomoću ELISA kitova tvrtke R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.

2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u stvarnom vremenu

Ukupna RNA ekstrahirana je iz tkiva koljenskog zgloba pomoću TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD), reverzno transkribirana u cDNA i PCR-amplificirana pomoću TM One Step RT PCR kita sa SYBR green bojom (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Kvantitativna PCR u stvarnom vremenu provedena je pomoću Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sustava (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Sekvence primera i sekvenca sonde prikazane su u Tablici1Alikvoti uzoraka cDNA i jednaka količina GAPDH cDNA amplificirani su s TaqMan® Universal PCR master smjesom koja sadrži DNA polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, CA, SAD). Uvjeti PCR-a bili su 2 min na 50°C, 10 min na 94°C, 15 s na 95°C i 1 min na 60°C tijekom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena određena je korištenjem metode usporedne Ct (broj ciklusa praga na točki križanja između amplifikacijskog dijagrama i praga), prema uputama proizvođača.

Cijena FOB-a:0,5 - 9.999 USD / komad

Minimalna količina narudžbe:100 komada/komada

Mogućnost opskrbe:10000 komada/komada mjesečno