-
Hladno prešano organsko ulje jojobe, ulje sjemenki jojobe za masažu za njegu kože
Glavni sastojci prirodnog ulja jojobe su palmitinska kiselina, eruka kiselina, oleinska kiselina i gadoleinska kiselina. Ulje jojobe također je bogato vitaminima poput vitamina E i vitamina B kompleksa.
Tekući biljni vosak biljke Jojoba je zlatne boje. Biljno ulje jojobe ima karakterističnu orašastu aromu i poželjan je dodatak proizvodima za osobnu njegu kao što su kreme, šminka, šamponi itd. Biljno ulje jojobe može se izravno nanijeti na kožu kod opeklina od sunca, psorijaze i akni. Čisto ulje jojobe također potiče rast kose.
-
Prirodno čisto organsko eterično ulje lavande za aromaterapijsku njegu kože
Metoda ekstrakcije ili obrade: destilirana vodenom parom
Destilacija Dio ekstrakcije: cvijet
Zemlja porijekla: Kina
Primjena: Difuzna/aromaterapija/masaža
Rok trajanja: 3 godine
Prilagođena usluga: prilagođena naljepnica i kutija ili prema vašem zahtjevu
Certifikacija: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% čisto prirodno organsko eterično ulje korteksa magnolije Officmalis za njegu kože
Miris Hou Poa odmah je gorak i oštro opor, a zatim se postupno otvara dubokom, sirupastom slatkoćom i toplinom.
Hou Po-ov afinitet je prema elementima Zemlje i Metala gdje njegova gorka toplina snažno djeluje na spuštanje Qi-ja i isušuje vlagu. Zbog ovih svojstava koristi se u kineskoj medicini za ublažavanje stagnacije i nakupljanja u probavnom traktu, kao i kašlja i piskanja zbog šlajma koji začepljuju pluća.
Magnolia Officinials je listopadno drvo porijeklom iz planina i dolina Sichuana, Hubeija i drugih provincija Kine. Izrazito aromatična kora koja se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini skida se sa stabljika, grana i korijena koji se skupljaju od travnja do lipnja. Debela, glatka kora, teška od ulja, ima ljubičastu boju s unutarnje strane s kristalnim sjajem.
Praktičari bi mogli razmotriti kombiniranje Hou Poa s Qing Pi eteričnim uljem kao komplimentom gornje note u mješavinama čiji je cilj razbijanje nakupina.
-
OEM prilagođeni paket Prirodno ulje rizoma makrocefala
Kao učinkovito kemoterapeutsko sredstvo, 5-fluorouracil (5-FU) ima široku primjenu u liječenju malignih tumora gastrointestinalnog trakta, glave, vrata, prsnog koša i jajnika. A 5-FU je lijek prve linije za kolorektalni karcinom u klinici. Mehanizam djelovanja 5-FU je blokiranje transformacije uracil nukleinske kiseline u timin nukleinsku kiselinu u tumorskim stanicama, zatim utječe na sintezu i popravak DNA i RNA kako bi se postigao njegov citotoksični učinak (Afzal et al., 2009; Ducreux et al. sur., 2015.; Longley i sur., 2003.). Međutim, 5-FU također uzrokuje proljev izazvan kemoterapijom (CID), jednu od najčešćih nuspojava koja muči mnoge pacijente (Filho et al., 2016.). Učestalost proljeva u bolesnika liječenih 5-FU bila je do 50%-80%, što je ozbiljno utjecalo na napredak i učinkovitost kemoterapije (Iacovelli i sur., 2014.; Rosenoff i sur., 2006.). Posljedično, od velike je važnosti pronaći učinkovitu terapiju za CID izazvanu 5-FU.
Trenutačno su intervencije bez lijekova i intervencije lijekovima uvezene u kliničko liječenje CID-a. Intervencije bez lijekova uključuju razumnu prehranu i dodatak soli, šećera i drugih hranjivih tvari. Lijekovi poput loperamida i oktreotida često se koriste u terapiji CID-a protiv proljeva (Benson i sur., 2004.). Osim toga, etnomedicine se također usvajaju za liječenje CID-a svojom vlastitom jedinstvenom terapijom u raznim zemljama. Tradicionalna kineska medicina (TCM) tipična je etnomedicina koja se prakticira više od 2000 godina u zemljama istočne Azije, uključujući Kinu, Japan i Koreju (Qi et al., 2010.). TCM smatra da bi kemoterapijski lijekovi potaknuli potrošnju Qi-ja, nedostatak slezene, disharmoniju želuca i endofitsku vlagu, što bi rezultiralo disfunkcijom vodljivosti crijeva. U teoriji TCM-a, strategija liječenja CID-a trebala bi uglavnom ovisiti o nadopunjavanju Qi-ja i jačanju slezene (Wang et al., 1994.).
Osušeni korijeniAtractylodes macrocephalaKoidz. (AM) iPanax ginsengCA Mey. (PG) su tipični biljni lijekovi u TCM-u s istim učinkom nadopunjavanja Qi-ja i jačanja slezene (Li et al., 2014.). AM i PG obično se koriste kao biljni par (najjednostavniji oblik kineske biljne kompatibilnosti) s učinkom nadopunjavanja Qi-ja i jačanja slezene za liječenje proljeva. Na primjer, AM i PG dokumentirani su u klasičnim formulama protiv proljeva kao što su Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang izTaiping Huimin Heji Ju Fang(dinastija Song, Kina) i Bu Zhong Yi Qi Tang izPi Wei Lun(dinastija Yuan, Kina) (slika 1). Nekoliko prethodnih studija pokazalo je da sve tri formule imaju sposobnost ublažavanja CID-a (Bai i sur., 2017.; Chen i sur., 2019.; Gou i sur., 2016.). Osim toga, naše prethodno istraživanje pokazalo je da kapsula Shenzhu koja sadrži samo AM i PG ima potencijalne učinke na liječenje proljeva, kolitisa (xiexie sindrom) i drugih gastrointestinalnih bolesti (Feng i sur., 2018.). Međutim, nijedna studija nije raspravljala o učinku i mehanizmu AM i PG u liječenju CID-a, bilo u kombinaciji ili zasebno.
Sada se mikrobiota crijeva smatra potencijalnim čimbenikom u razumijevanju terapeutskog mehanizma TKM-a (Feng i sur., 2019.). Suvremene studije pokazuju da crijevna mikrobiota igra ključnu ulogu u održavanju crijevne homeostaze. Zdrava crijevna mikrobiota doprinosi zaštiti crijevne sluznice, metabolizmu, imunološkoj homeostazi i odgovoru te supresiji patogena (Thursby i Juge, 2017.; Pickard i sur., 2017.). Poremećena crijevna mikrobiota izravno ili neizravno oštećuje fiziološke i imunološke funkcije ljudskog tijela, izazivajući nuspojave poput proljeva (Patel i sur., 2016.; Zhao i Shen, 2010.). Istraživanja su pokazala da je 5-FU značajno promijenio strukturu crijevne mikrobiote kod miševa s proljevom (Li et al., 2017.). Stoga, učinci AM i PM na proljev izazvan 5-FU mogu biti posredovani crijevnom mikrobiotom. Međutim, još uvijek nije poznato mogu li AM i PG sami i u kombinaciji spriječiti proljev izazvan 5-FU modulacijom crijevne mikrobiote.
Kako bismo istražili učinke protiv proljeva i temeljni mehanizam AM i PG, upotrijebili smo 5-FU za simulaciju modela proljeva kod miševa. Ovdje smo se usredotočili na potencijalne učinke pojedinačne i kombinirane primjene (AP).Atractylodes macrocephalaeterično ulje (AMO) iPanax ginsengukupni saponini (PGS), aktivne komponente ekstrahirane iz AM i PG, na proljev, crijevnu patologiju i mikrobnu strukturu nakon kemoterapije 5-FU.
-
100% čisto prirodno Eucommiae Foliuml eterično ulje za njegu kože
Eucommia ulmoides(EU) (obično zvano "Du Zhong" na kineskom jeziku) pripadaju obitelji Eucommiaceae, rodu malog drveća porijeklom iz središnje Kine [1]. Ova biljka se naširoko uzgaja u Kini u velikim razmjerima zbog svoje medicinske važnosti. Iz EU je izolirano oko 112 spojeva koji uključuju lignane, iridoide, fenole, steroide i druge spojeve. Komplementarna biljna formula ove biljke (kao što je ukusan čaj) pokazala je neka ljekovita svojstva. List EU ima veću aktivnost vezanu uz koru, cvijet i plod [2,3]. Zabilježeno je da listovi EU-a povećavaju snagu kostiju i tjelesne mišiće [4], što dovodi do dugovječnosti i potiče plodnost kod ljudi [5]. Ukusna formula čaja napravljena od lišća EU-a navodno smanjuje masnoću i poboljšava energetski metabolizam. Flavonoidni spojevi (kao što su rutin, klorogenska kiselina, ferulinska kiselina i kafeinska kiselina) pokazuju antioksidativno djelovanje u lišću EU [6].
Iako postoji dovoljno literature o fitokemijskim svojstvima EU-a, postoji nekoliko studija o farmakološkim svojstvima različitih spojeva ekstrahiranih iz kore, sjemenki, stabljika i lišća EU-a. Ovaj pregledni rad će razjasniti detaljne informacije o različitim spojevima ekstrahiranim iz različitih dijelova (kore, sjemenki, stabljike i lišća) EU-a i potencijalne upotrebe tih spojeva u svojstvima koja promiču zdravlje sa znanstvenim linijama dokaza i tako pružiti referentni materijal za primjenu EU.
-
Čisto prirodno ulje Houttuynia cordata Ulje Houttuynia Cordata Lchthammolum Oil
U većini zemalja u razvoju, 70-95% stanovništva oslanja se na tradicionalnu medicinu za primarnu zdravstvenu zaštitu, a od tih 85% ljudi koristi biljke ili njihove ekstrakte kao djelatnu tvar.[1] Potraga za novim biološki aktivnim spojevima iz biljaka obično ovisi o specifičnim etničkim i narodnim informacijama dobivenim od lokalnih praktičara i još uvijek se smatra važnim izvorom za otkrivanje lijekova. U Indiji je oko 2000 lijekova biljnog porijekla.[2] S obzirom na veliki interes za korištenje ljekovitog bilja, ovaj pregled oHouttuynia cordataThunb. pruža najnovije informacije s obzirom na botaničke, komercijalne, etnofarmakološke, fitokemijske i farmakološke studije koje se pojavljuju u literaturi.H. cordataThunb. pripada obiteljiSaururaceaei općenito je poznat kao rep kineskog guštera. To je višegodišnja zeljasta biljka sa stolonifernim rizomom koja ima dva različita kemotipa.[3,4] Kineski kemotip vrste nalazi se u divljim i poludivljim uvjetima na sjeveroistoku Indije od travnja do rujna.[5,6,7]H. cordatadostupan je u Indiji, posebno u dolini Brahmaputra u Assamu i koriste ga različita plemena Assama u obliku povrća, kao iu razne medicinske svrhe tradicionalno.
-
100% PureArctium lappa ulje Proizvođač – prirodno ulje limete Arctium lappa s certifikatima za osiguranje kvalitete
Zdravstvene dobrobiti
Korijen čička često se jede, no može se i osušiti i potopiti u čaj. Djeluje dobro kao izvor inulina, aprebiotikvlakna koja pospješuju probavu i poboljšavaju zdravlje crijeva. Osim toga, ovaj korijen sadrži flavonoide (biljne hranjive tvari),fitokemikalije, i antioksidansi za koje se zna da imaju zdravstvene prednosti.
Osim toga, korijen čička može pružiti i druge prednosti kao što su:
Smanjite kroničnu upalu Korijen čička sadrži niz antioksidansa, poput kvercetina, fenolnih kiselina i luteolina, koji mogu pomoći u zaštiti vaših stanica odslobodnih radikala. Ovi antioksidansi pomažu smanjiti upale u cijelom tijelu.
Zdravstveni rizici
Korijen čička smatra se sigurnim za jesti ili piti kao čaj. Međutim, ova biljka jako nalikuje biljkama velebilje belladonna, koje su otrovne. Preporuča se kupovati korijen čička samo od provjerenih prodavača i suzdržati se od samostalnog sakupljanja. Osim toga, postoji minimalan broj informacija o njegovim učincima na djecu ili trudnice. Razgovarajte sa svojim liječnikom prije upotrebe korijena čička kod djece ili ako ste trudni.
Evo nekih drugih mogućih zdravstvenih rizika koje treba uzeti u obzir ako koristite korijen čička:
Povećana dehidracija
Korijen čička djeluje poput prirodnog diuretika, što može dovesti do dehidracije. Ako uzimate tablete za izmokravanje ili druge diuretike, ne smijete uzimati korijen čička. Ako uzimate ove lijekove, važno je biti svjestan drugih lijekova, biljaka i sastojaka koji mogu dovesti do dehidracije.
Alergijska reakcija
Ako ste osjetljivi ili imate povijest alergijskih reakcija na tratinčice, ambroziju ili krizanteme, izloženi ste povećanom riziku od alergijske reakcije na korijen čička.
-
Veleprodajna rasuta cijena 100% čisti AsariRadix Et Rhizoma ulje Relax Aromaterapija Eucalyptus globulus
Studije na životinjama i in vitro istraživale su potencijalne protugljivične, protuupalne i kardiovaskularne učinke sassafrasa i njegovih komponenti. Međutim, nedostaju klinička ispitivanja, a sassafras se ne smatra sigurnim za upotrebu. Safrol, glavni sastojak kore i ulja korijena sassafras, zabranila je američka Agencija za hranu i lijekove (FDA), uključujući upotrebu kao arome ili mirisa, i ne bi se trebao koristiti interno ili eksterno, jer je potencijalno kancerogen. Safrol se koristio u ilegalnoj proizvodnji 3,4-metilen-dioksimetamfetamina (MDMA), također poznatog pod uličnim imenima "ecstasy" ili "Molly", a prodaju ulja safrola i sassafrasa prati američka Uprava za borbu protiv droga
-
Veleprodajna rasuta cijena 100% čisto eterično ulje Stellariae Radix (novo) Opuštajuća aromaterapija Eucalyptus globulus
Kineska farmakopeja (izdanje 2020.) zahtijeva da metanolni ekstrakt YCH ne smije biti manji od 20,0% [2], bez navedenih drugih pokazatelja kvalitete. Rezultati ove studije pokazuju da je sadržaj metanolnih ekstrakata divljih i kultiviranih uzoraka udovoljavao standardu farmakopeje i nije bilo značajne razlike među njima. Stoga nije bilo očite razlike u kvaliteti između divljih i kultiviranih uzoraka, prema tom indeksu. Međutim, sadržaji ukupnih sterola i ukupnih flavonoida u divljim uzorcima bili su značajno viši od onih u kultiviranim uzorcima. Daljnja metabolomska analiza otkrila je veliku raznolikost metabolita između divljih i kultiviranih uzoraka. Dodatno, analizirano je 97 značajno različitih metabolita koji su navedeni uDodatna tablica S2. Među tim značajno različitim metabolitima su β-sitosterol (ID je M397T42) i derivati kvercetina (M447T204_2), za koje se navodi da su aktivni sastojci. Prethodno neprijavljeni sastojci, kao što su trigonelin (M138T291_2), betain (M118T277_2), fustin (M269T36), rotenon (M241T189), arktiin (M557T165) i loganska kiselina (M399T284_2), također su uključeni među različite metabolite. Ove komponente igraju različite uloge u antioksidaciji, protuupali, hvatanju slobodnih radikala, borbi protiv raka i liječenju ateroskleroze i, prema tome, mogu predstavljati navodne nove aktivne komponente u YCH. Sadržaj djelatnih tvari određuje učinkovitost i kvalitetu ljekovitih tvari [7]. Ukratko, metanolni ekstrakt kao jedini indeks evaluacije kvalitete YCH ima neka ograničenja i potrebno je dodatno istražiti specifičnije markere kvalitete. Postojale su značajne razlike u ukupnim sterolima, ukupnim flavonoidima i sadržajima mnogih drugih različitih metabolita između divljeg i kultiviranog YCH; tako da su među njima potencijalno postojale neke razlike u kvaliteti. U isto vrijeme, novootkriveni potencijalni aktivni sastojci u YCH mogli bi imati važnu referentnu vrijednost za proučavanje funkcionalne osnove YCH i daljnji razvoj izvora YCH.
Važnost izvornih ljekovitih materijala odavno je prepoznata u specifičnoj regiji podrijetla za proizvodnju kineskih biljnih lijekova izvrsne kvalitete [8]. Visoka kvaliteta je bitan atribut pravih ljekovitih materijala, a stanište je važan čimbenik koji utječe na kvalitetu takvih materijala. Otkako se YCH počeo koristiti kao lijek, dugo je dominirao divlji YCH. Nakon uspješnog uvođenja i pripitomljavanja YCH u Ningxia 1980-ih, izvor Yinchaihu ljekovitog materijala postupno se pomaknuo s divljeg na uzgojeni YCH. Prema prethodnoj istrazi izvora YCH [9] i terenskim istraživanjima naše istraživačke skupine, postoje značajne razlike u područjima distribucije uzgojenog i samoniklog ljekovitog materijala. Divlji YCH uglavnom je rasprostranjen u autonomnoj regiji Ningxia Hui u provinciji Shaanxi, u blizini sušne zone unutarnje Mongolije i središnje Ningxie. Konkretno, pustinjska stepa u tim je područjima najprikladnije stanište za rast YCH. Nasuprot tome, uzgojeni YCH uglavnom je rasprostranjen na jugu divljeg područja rasprostranjenosti, kao što je okrug Tongxin (kultiviran I) i njegova okolna područja, koji je postao najveća baza za uzgoj i proizvodnju u Kini, i okrug Pengyang (kultiviran II) , koji se nalazi u južnijem području i još je jedno proizvodno područje za uzgoj YCH. Štoviše, staništa gornja dva kultivirana područja nisu pustinjska stepa. Stoga, osim u načinu proizvodnje, postoje i značajne razlike u staništu divljeg i kultiviranog YCH. Stanište je važan čimbenik koji utječe na kvalitetu biljnih ljekovitih materijala. Različita staništa utjecat će na stvaranje i nakupljanje sekundarnih metabolita u biljkama, a time i na kvalitetu ljekovitih proizvoda [10,11]. Stoga bi značajne razlike u sadržaju ukupnih flavonoida i ukupnih sterola te ekspresiji 53 metabolita koje smo pronašli u ovoj studiji mogle biti rezultat upravljanja poljima i razlika u staništima.Jedan od glavnih načina na koji okoliš utječe na kvalitetu ljekovitih materijala je izlaganje izvornim biljkama. Umjereni okolišni stres ima tendenciju stimulirati nakupljanje sekundarnih metabolita [12,13]. Hipoteza o ravnoteži rasta/diferencijacije kaže da, kada su hranjive tvari u dovoljnoj količini, biljke prvenstveno rastu, dok kada su hranjive tvari manjkave, biljke se uglavnom diferenciraju i proizvode više sekundarnih metabolita [14]. Stres od suše uzrokovan nedostatkom vode glavni je ekološki stres s kojim se suočavaju biljke u sušnim područjima. U ovoj studiji stanje vode u kultiviranom YCH je obilnije, s godišnjim razinama padalina znatno višim od onih za divlji YCH (opskrba vodom za kultivirani I bila je oko 2 puta veća od divljeg; kultivirani II bila je oko 3,5 puta veća od divljeg ). Osim toga, tlo u divljini je pjeskovito tlo, ali tlo na poljoprivrednom zemljištu je glinasto tlo. U usporedbi s glinom, pjeskovito tlo ima lošu sposobnost zadržavanja vode i vjerojatnije je da će pogoršati stres od suše. Istodobno, proces uzgoja često je bio popraćen zalijevanjem, pa je stupanj stresa od suše bio nizak. Divlji YCH raste u surovim prirodnim sušnim staništima i stoga može pretrpjeti ozbiljniji stres od suše.Osmoregulacija je važan fiziološki mehanizam kojim se biljke nose sa stresom od suše, a alkaloidi su važni osmotski regulatori u višim biljkama [15]. Betaini su alkaloidni kvaterni amonijevi spojevi topljivi u vodi i mogu djelovati kao osmoprotektori. Stres od suše može smanjiti osmotski potencijal stanica, dok osmoprotektori čuvaju i održavaju strukturu i cjelovitost bioloških makromolekula te učinkovito ublažavaju štetu uzrokovanu stresom od suše na biljkama [16]. Na primjer, pod stresom zbog suše, sadržaj betaina u šećernoj repi i Lycium barbarum značajno se povećao [17,18]. Trigonelin je regulator staničnog rasta, a pod stresom od suše može produžiti duljinu staničnog ciklusa biljke, inhibirati rast stanica i dovesti do smanjenja volumena stanica. Relativno povećanje koncentracije otopljene tvari u stanici omogućuje biljci postizanje osmotske regulacije i povećava njezinu sposobnost otpornosti na stres od suše [19]. JIA X [20] otkrili su da, s povećanjem stresa od suše, Astragalus membranaceus (izvor tradicionalne kineske medicine) proizvodi više trigonelina, koji regulira osmotski potencijal i poboljšava sposobnost otpora na stres od suše. Također se pokazalo da flavonoidi igraju važnu ulogu u otpornosti biljaka na stres od suše [21,22]. Velik broj studija potvrdio je da je umjereni stres uzrokovan sušom pogodovao nakupljanju flavonoida. Lang Duo-Yong i sur. [23] usporedio je učinke stresa od suše na YCH kontroliranjem kapaciteta zadržavanja vode u polju. Utvrđeno je da je stres od suše u određenoj mjeri inhibirao rast korijena, ali kod umjerenog i jakog stresa od suše (40% kapaciteta zadržavanja vode u polju), ukupni sadržaj flavonoida u YCH se povećao. U međuvremenu, pod stresom zbog suše, fitosteroli mogu djelovati tako da reguliraju fluidnost i propusnost stanične membrane, inhibiraju gubitak vode i poboljšavaju otpornost na stres [24,25]. Stoga bi povećano nakupljanje ukupnih flavonoida, ukupnih sterola, betaina, trigonelina i drugih sekundarnih metabolita u divljem YCH moglo biti povezano sa stresom od suše visokog intenziteta.U ovoj studiji provedena je analiza obogaćivanja KEGG puta na metabolitima za koje je utvrđeno da se značajno razlikuju između divljeg i kultiviranog YCH. Obogaćeni metaboliti uključivali su one uključene u metabolizam askorbata i aldarata, biosintezu aminoacil-tRNA, metabolizam histidina i metabolizam beta-alanina. Ovi metabolički putovi usko su povezani s mehanizmima otpornosti biljaka na stres. Među njima, metabolizam askorbata igra važnu ulogu u proizvodnji biljnih antioksidansa, metabolizmu ugljika i dušika, otpornosti na stres i drugim fiziološkim funkcijama [26]; Biosinteza aminoacil-tRNA važan je put za stvaranje proteina [27,28], koji je uključen u sintezu proteina otpornih na stres. I histidinski i β-alaninski putevi mogu povećati otpornost biljaka na okolišni stres [29,30]. To nadalje ukazuje da su razlike u metabolitima između divljeg i kultiviranog YCH usko povezane s procesima otpornosti na stres.Tlo je materijalna osnova za rast i razvoj ljekovitog bilja. Dušik (N), fosfor (P) i kalij (K) u tlu važni su hranjivi elementi za rast i razvoj biljaka. Organska tvar tla također sadrži N, P, K, Zn, Ca, Mg i druge makroelemente i elemente u tragovima potrebne ljekovitom bilju. Prekomjerna ili manjkava količina hranjivih tvari, ili neuravnoteženi omjeri hranjivih tvari, utjecat će na rast i razvoj i kvalitetu ljekovitog materijala, a različite biljke imaju različite potrebe za hranjivim tvarima [31,32,33]. Na primjer, nizak dušikov stres pospješio je sintezu alkaloida u Isatis indigotica i bio je koristan za nakupljanje flavonoida u biljkama kao što su Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge i Dichondra repens Forst. Nasuprot tome, previše N inhibira nakupljanje flavonoida kod vrsta kao što su Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis i Ginkgo biloba, te utječe na kvalitetu ljekovitih materijala [34]. Primjena P gnojiva bila je učinkovita u povećanju sadržaja glicirizinske kiseline i dihidroacetona u Uralskom sladiću [35]. Kada je primijenjena količina premašila 0,12 kg·m−2, ukupni sadržaj flavonoida u Tussilago farfara se smanjio [36]. Primjena P gnojiva negativno je utjecala na sadržaj polisaharida u tradicionalnoj kineskoj medicini rhizoma polygonati [37], ali je K gnojivo bilo učinkovito u povećanju sadržaja saponina [38]. Primjena 450 kg·hm-2 K gnojiva bila je najbolja za rast i nakupljanje saponina dvogodišnjeg Panax notoginseng [39]. U omjeru N:P:K = 2:2:1 najveće su ukupne količine hidrotermalnog ekstrakta, harpagida i harpagosida [40]. Visoki omjer N, P i K bio je koristan za poticanje rasta Pogostemon cablin i povećanje sadržaja hlapljivog ulja. Nizak omjer N, P i K povećao je sadržaj glavnih učinkovitih komponenti ulja stabljike Pogostemon cablin [41]. YCH je biljka otporna na neplodno tlo i može imati posebne zahtjeve za hranjivim tvarima kao što su N, P i K. U ovoj studiji, u usporedbi s kultiviranim YCH, tlo divljih biljaka YCH bilo je relativno neplodno: sadržaj tla organske tvari, ukupni N, ukupni P i ukupni K bili su oko 1/10, 1/2, 1/3 i 1/3 onih u kultiviranim biljkama. Stoga bi razlike u hranjivim tvarima u tlu mogle biti još jedan razlog za razlike između metabolita otkrivenih u kultiviranom i divljem YCH. Weibao Ma i sur. [42] otkrili su da primjena određene količine N gnojiva i P gnojiva značajno poboljšava prinos i kvalitetu sjemena. Međutim, učinak hranjivih elemenata na kvalitetu YCH nije jasan, a mjere gnojidbe za poboljšanje kvalitete ljekovitog materijala potrebno je dodatno proučavati.Kineski biljni lijekovi imaju karakteristike "povoljna staništa potiču prinos, a nepovoljna staništa poboljšavaju kvalitetu" [43]. U procesu postupnog prelaska s divljeg na kultivirani YCH, stanište biljaka promijenilo se iz sušne i neplodne pustinjske stepe u plodno poljoprivredno zemljište s više vode. Stanište uzgojenog YCH-a je superiornije, a prinos je veći, što pomaže u ispunjavanju potražnje na tržištu. Međutim, ovo superiorno stanište dovelo je do značajnih promjena u metabolitima YCH; je li to pogodno za poboljšanje kvalitete YCH i kako postići visokokvalitetnu proizvodnju YCH putem znanstveno utemeljenih mjera uzgoja zahtijevat će daljnja istraživanja.Simulativni uzgoj staništa je metoda simulacije stanišnih i ekoloških uvjeta samoniklog ljekovitog bilja, koja se temelji na spoznaji o dugoročnoj prilagodbi biljaka na specifične okolišne stresove [43]. Simulirajući različite čimbenike okoliša koji utječu na divlje biljke, posebno izvorno stanište biljaka koje se koriste kao izvori autentičnih ljekovitih materijala, pristup koristi znanstveni dizajn i inovativnu ljudsku intervenciju kako bi se uravnotežio rast i sekundarni metabolizam kineskih ljekovitih biljaka [43]. Metoda ima za cilj postići optimalne aranžmane za razvoj visokokvalitetnih medicinskih materijala. Simulativno uzgajanje staništa trebalo bi osigurati učinkovit način za visokokvalitetnu proizvodnju YCH čak i kada su farmakodinamička osnova, markeri kvalitete i mehanizmi odgovora na čimbenike okoliša nejasni. Sukladno tome, predlažemo da se mjere znanstvenog dizajna i upravljanja poljem u uzgoju i proizvodnji YCH trebaju provoditi s obzirom na karakteristike okoliša divljeg YCH, kao što su uvjeti sušnog, neplodnog i pjeskovitog tla. U isto vrijeme, također se nadamo da će istraživači provesti dublja istraživanja o funkcionalnoj materijalnoj osnovi i pokazateljima kvalitete YCH. Ove studije mogu pružiti učinkovitije kriterije ocjenjivanja za YCH i promicati visokokvalitetnu proizvodnju i održivi razvoj industrije. -
Herbal Fructus Amomi ulje Prirodna masaža Difuzori 1kg Bulk Amomum villosum Eterično ulje
Obitelj Zingiberaceae privukla je sve veću pozornost u alelopatskim istraživanjima zbog bogatstva hlapljivih ulja i aromatičnosti vrsta koje pripadaju. Prethodna istraživanja su pokazala da su kemikalije iz Curcuma zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] i Zingiber officinale Rosc. [42] iz obitelji đumbira imaju alelopatske učinke na klijanje sjemena i rast presadnica kukuruza, salate i rajčice. Naše trenutno istraživanje je prvo izvješće o alelopatskoj aktivnosti hlapljivih tvari iz stabljika, lišća i mladih plodova A. villosum (član obitelji Zingiberaceae). Prinos ulja iz stabljika, lišća i mladih plodova bio je 0,15%, 0,40%, odnosno 0,50%, što ukazuje da su plodovi proizvodili veću količinu hlapljivih ulja nego stabljike i listovi. Glavne komponente hlapljivih ulja iz stabljika bile su β-pinen, β-felandren i α-pinen, što je bio uzorak sličan onom kod glavnih kemikalija ulja lišća, β-pinena i α-pinena (monoterpenski ugljikovodici). S druge strane, ulje u mladim plodovima bilo je bogato bornilacetatom i kamforom (oksigenirani monoterpeni). Rezultati su potkrijepljeni nalazima Do N Dai [30,32] i Hui Ao [31] koji je identificirao ulja iz različitih organa A. villosum.
Bilo je nekoliko izvješća o inhibitornom djelovanju ovih glavnih spojeva na rast biljaka kod drugih vrsta. Shalinder Kaur otkrio je da α-pinen iz eukaliptusa značajno smanjuje duljinu korijena i visinu izboja Amaranthus viridis L. pri koncentraciji od 1,0 µL [43], a druga je studija pokazala da α-pinen inhibira rani rast korijena i uzrokuje oksidacijska oštećenja u tkivu korijena kroz povećano stvaranje reaktivnih vrsta kisika [44]. Neki izvještaji tvrde da je β-pinen inhibirao klijanje i rast sadnica testiranih korova na način koji ovisi o dozi, narušavanjem integriteta membrane [45], mijenjajući biokemiju biljaka i pojačavajući aktivnosti peroksidaza i polifenol oksidaza [46]. β-felandren je pokazao maksimalnu inhibiciju klijanja i rasta Vigna unguiculata (L.) Walp u koncentraciji od 600 ppm [47], dok je u koncentraciji od 250 mg/m3 kamfor potisnuo rast korijena i izdanaka Lepidium sativum L. [48]. Međutim, istraživanja koja izvješćuju o alelopatskom učinku bornil acetata su oskudna. U našoj studiji, alelopatsko djelovanje β-pinena, bornil acetata i kamfora na duljinu korijena bilo je slabije nego za hlapljiva ulja osim α-pinena, dok je ulje lišća, bogato α-pinenom, također bilo fitotoksičnije od odgovarajuće hlapljive tvari. ulja iz stabljika i plodova A. villosum, oba otkrića pokazuju da bi α-pinen mogao biti važna kemikalija za alelopatiju ove vrste. U isto vrijeme, rezultati su također implicirali da bi neki spojevi u voćnom ulju kojih nema u izobilju mogli pridonijeti stvaranju fitotoksičnog učinka, što je otkriće koje treba dodatno istražiti u budućnosti.U normalnim uvjetima, alelopatsko djelovanje alelokemikalija je specifično za vrstu. Jiang i sur. otkrili su da eterično ulje koje proizvodi Artemisia sieversiana ima snažniji učinak na Amaranthus retroflexus L. nego na Medicago sativa L., Poa annua L. i Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49]. U drugoj studiji, hlapljivo ulje Lavandula angustifolia Mill. proizvodi različite stupnjeve fitotoksičnih učinaka na različite biljne vrste. Lolium multiflorum Lam. bio je najosjetljivija akceptorska vrsta, rast hipokotila i radikula bio je inhibiran za 87,8% odnosno 76,7%, pri dozi od 1 μL/mL ulja, ali je rast hipokotila presadnica krastavca bio jedva pogođen [20]. Naši rezultati su također pokazali da postoji razlika u osjetljivosti na hlapljive tvari A. villosum između L. sativa i L. perenne.Hlapljivi spojevi i eterična ulja iste vrste mogu se kvantitativno i/ili kvalitativno razlikovati zbog uvjeta rasta, dijelova biljke i metoda detekcije. Na primjer, izvješće je pokazalo da su piranoid (10,3%) i β-kariofilen (6,6%) glavni spojevi hlapljivih tvari koje se emitiraju iz lišća Sambucus nigra, dok su benzaldehid (17,8%), α-bulnesene (16,6%) i tetrakozan (11,5%) bilo je u izobilju u uljima ekstrahiranim iz lišća [50]. U našem istraživanju, hlapljivi spojevi koje oslobađaju svježi biljni materijali imali su jače alelopatske učinke na ispitivane biljke nego ekstrahirana hlapljiva ulja, a razlike u odgovoru usko su povezane s razlikama u alelokemikalijama prisutnim u dva pripravka. Točne razlike između hlapljivih spojeva i ulja potrebno je dodatno istražiti u sljedećim eksperimentima.Razlike u mikrobnoj raznolikosti i strukturi mikrobne zajednice u uzorcima tla kojima su dodana hlapljiva ulja bile su povezane s kompeticijom među mikroorganizmima kao i s bilo kakvim toksičnim učincima i trajanjem hlapljivih ulja u tlu. Vokou i Liotiri [51] otkrio je da odgovarajuća primjena četiri eterična ulja (0,1 mL) na kultivirano tlo (150 g) aktivira disanje uzoraka tla, čak su se i ulja razlikovala u svom kemijskom sastavu, što sugerira da se biljna ulja koriste kao izvor ugljika i energije mikroorganizama koji se javljaju u tlu. Podaci dobiveni iz trenutne studije potvrdili su da su ulja iz cijele biljke A. villosum pridonijela očitom povećanju broja gljivičnih vrsta u tlu do 14. dana nakon dodavanja ulja, što ukazuje da ulje može osigurati izvor ugljika za više zemljišne gljive. Druga je studija objavila nalaz: mikroorganizmi u tlu oporavili su svoju početnu funkciju i biomasu nakon privremenog razdoblja varijacija izazvanih dodatkom ulja Thymbra capitata L. (Cav), ali ulje u najvećoj dozi (0,93 µL ulja po gramu tla) nisu dopustili mikroorganizmima tla da obnove početnu funkcionalnost [52]. U trenutnoj studiji, na temelju mikrobiološke analize tla nakon što je tretirano različitim danima i koncentracijama, pretpostavili smo da će se bakterijska zajednica tla oporaviti nakon više dana. Nasuprot tome, gljivična mikrobiota se ne može vratiti u svoje prvobitno stanje. Sljedeći rezultati potvrđuju ovu hipotezu: jasan učinak visoke koncentracije ulja na sastav mikrobioma gljiva u tlu otkriven je analizom glavnih koordinata (PCoA), a prezentacije toplinske karte ponovno su potvrdile da je sastav gljivične zajednice u tlu tretiran s 3,0 mg/mL ulja (odnosno 0,375 mg ulja po gramu tla) na razini roda znatno se razlikovao od ostalih tretmana. Trenutačno su istraživanja o učincima dodavanja monoterpenskih ugljikovodika ili oksigeniranih monoterpena na mikrobnu raznolikost tla i strukturu zajednice još uvijek oskudna. Nekoliko je studija izvijestilo da je α-pinen povećao mikrobnu aktivnost tla i relativnu brojnost Methylophilaceae (skupina methylotrophs, Proteobacteria) pod niskim sadržajem vlage, igrajući važnu ulogu kao izvor ugljika u sušim tlima [53]. Slično, hlapljivo ulje cijele biljke A. villosum, koje sadrži 15,03% α-pinena (Dodatna tablica S1), očito je povećao relativnu brojnost proteobakterija na 1,5 mg/mL i 3,0 mg/mL, što je sugeriralo da α-pinen možda djeluje kao jedan od izvora ugljika za mikroorganizme u tlu.Hlapljivi spojevi koje proizvode različiti organi A. villosum imali su različite stupnjeve alelopatskih učinaka na L. sativa i L. perenne, što je bilo usko povezano s kemijskim sastojcima koje su sadržavali biljni dijelovi A. villosum. Iako je kemijski sastav hlapljivog ulja potvrđen, hlapljivi spojevi koje oslobađa A. villosum na sobnoj temperaturi su nepoznati, što zahtijeva daljnje istraživanje. Štoviše, sinergistički učinak između različitih alelokemikalija također je vrijedan razmatranja. Što se tiče mikroorganizama u tlu, kako bismo sveobuhvatno istražili učinak hlapljivog ulja na mikroorganizme u tlu, još uvijek moramo provesti detaljnija istraživanja: produžiti vrijeme obrade hlapljivog ulja i uočiti varijacije u kemijskom sastavu hlapljivog ulja u tlu različitim danima. -
Čisto ulje Artemisia capillaris za izradu svijeća i sapuna, eterično ulje za difuzore na veliko, novo za difuzore plamenika od trske
Dizajn modela glodavaca
Životinje su nasumično podijeljene u pet skupina od po petnaest miševa. Miševima kontrolne skupine i modelne skupine davana je sondasezamovo uljeza 6 dana. Miševima pozitivne kontrolne skupine davane su tablete bifendata (BT, 10 mg/kg) tijekom 6 dana. Eksperimentalne skupine su tretirane sa 100 mg/kg i 50 mg/kg AEO otopljenog u sezamovom ulju tijekom 6 dana. Šestog dana, kontrolna skupina tretirana je sezamovim uljem, a sve druge skupine tretirane su jednom dozom od 0,2% CCl4 u sezamovom ulju (10 ml/kg)intraperitonealna injekcija. Miševi su zatim izgladnjivani bez vode, a uzorci krvi su sakupljeni iz retrobulbarnih žila; prikupljena krv je centrifugirana na 3000 ×g10 min da se odvoji serum.Cervikalna dislokacijaizvršena je odmah nakon uzimanja krvi, a uzorci jetre su promptno uzeti. Jedan dio uzorka jetre odmah je pohranjen na -20 °C do analize, a drugi dio je izrezan i fiksiran u 10%formalinotopina; preostala tkiva pohranjena su na -80 °C za histopatološku analizu (Wang i sur., 2008,Hsu i sur., 2009,Nie i sur., 2015).
Mjerenje biokemijskih parametara u serumu
Oštećenje jetre procijenjeno je procjenomenzimske aktivnostiserumskih ALT i AST korištenjem odgovarajućih komercijalnih kitova prema uputama za setove (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Enzimske aktivnosti su izražene kao jedinice po litri (U/l).
Mjerenje MDA, SOD, GSH i GSH-Pxu homogenatima jetre
Tkiva jetre homogenizirana su hladnom fiziološkom otopinom u omjeru 1:9 (w/v, jetra:fiziološka otopina). Homogenati su centrifugirani (2500 xg10 min) za prikupljanje supernatanta za sljedeća određivanja. Oštećenje jetre procijenjeno je prema jetrenim mjerenjima razina MDA i GSH, kao i SOD i GSH-Pxaktivnosti. Sve je to određeno prema uputama na kompletu (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Rezultati za MDA i GSH izraženi su kao nmol po mg proteina (nmol/mg prot), a aktivnosti SOD i GSH-Pxizraženi su kao U po mg proteina (U/mg prot).
Histopatološka analiza
Dijelovi svježe dobivene jetre su fiksirani u 10% puferiranoj vodiparaformaldehidotopina fosfata. Uzorak je zatim umetnut u parafin, izrezan na dijelove od 3-5 μm, obojen shematoksilinieozin(H&E) prema standardnoj proceduri, te konačno analiziran od stranesvjetlosna mikroskopija(Tian i sur., 2012).
Statistička analiza
Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Rezultati su analizirani pomoću statističkog programa SPSS Statistics, verzija 19.0. Podaci su podvrgnuti analizi varijance (ANOVA,p< 0,05), a zatim Dunnettov test i Dunnettov T3 test za određivanje statistički značajnih razlika između vrijednosti različitih eksperimentalnih skupina. Značajna razlika smatrana je na razinip< 0,05.
Rezultati i rasprava
Sastavnice AEO
Nakon GC/MS analize, utvrđeno je da AEO sadrži 25 sastojaka eluiranih od 10 do 35 minuta, a identificiran je 21 sastojak koji čini 84% eteričnog ulja (Tablica 1). Sadržano hlapljivo uljemonoterpenoidi(80,9%), seskviterpenoidi (9,5%), zasićeni nerazgranati ugljikovodici (4,86%) i razni acetilen (4,86%). U usporedbi s drugim studijama (Guo i sur., 2004), pronašli smo obilje monoterpenoida (80,90%) u AEO. Rezultati su pokazali da je najzastupljeniji sastojak AEO β-citronelol (16,23%). Ostale glavne komponente AEO uključuju 1,8-cineol (13,9%),kamfor(12,59%),linalol(11,33%), α-pinen (7,21%), β-pinen (3,99%),timol(3,22%) imircen(2,02%). Varijacije u kemijskom sastavu mogu biti povezane s okolišnim uvjetima kojima je biljka bila izložena, kao što su mineralna voda, sunčeva svjetlost, stupanj razvoja iprehrana.
-
Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za izradu svijeća i sapuna veleprodaja difuzora eterično ulje novo za difuzore plamenika od trske
2.1. Priprema SDE
Rizomi SD-a kupljeni su kao osušena biljka od Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljne materijale taksonomski je potvrdio dr. Go-Ya Choi s Korejskog instituta za istočnjačku medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) pohranjen je u Korejski herbarij standardnih biljnih izvora. Osušeni rizomi SD (320 g) ekstrahirani su dva puta sa 70% etanolom (uz 2 h refluksa) i ekstrakt je zatim koncentriran pod sniženim tlakom. Uvarak je filtriran, liofiliziran i pohranjen na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih početnih materijala bio je 48,13% (w/w).
2.2. Kvantitativna analiza tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti (HPLC).
Kromatografska analiza provedena je s HPLC sustavom (Waters Co., Milford, MA, SAD) i fotodiodnim detektorom s nizom. Za HPLC analizu SDE, prim.O- standard glukozilcimifugina kupljen je od Korejskog instituta za promociju tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja), isekund-O-glukozilhamaudol i 4'-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol izolirani su u našem laboratoriju i identificirani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.
SDE uzorci (0,1 mg) otopljeni su u 70% etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje provedeno je s XSelect HSS T3 C18 kolonom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza sastojala se od acetonitrila (A) i 0,1% octene kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je program gradijenta u više koraka kako slijedi: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min) i 20-65% A (23-40 min.) ). Valna duljina detekcije je skenirana na 210-400 nm i zabilježena na 254 nm. Volumen injekcije bio je 10,0μL. Standardne otopine za određivanje triju kromona pripremljene su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim.O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol), i 31,125 mg/mL (sekund-O-glukozilhamaudol) u metanolu i držan na 4°C.
2.3. Procjena protuupalnog djelovanjaIn Vitro
2.3.1. Kultura stanica i obrada uzorka
Stanice RAW 264.7 dobivene su iz American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) i uzgojene u DMEM mediju koji je sadržavao 1% antibiotika i 5,5% FBS. Stanice su inkubirane u vlažnoj atmosferi s 5% CO2 na 37°C. Za stimulaciju stanica, medij je zamijenjen svježim DMEM medijem i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SAD) na 1μg/mL je dodan u prisutnosti ili odsutnosti SDE (200 ili 400μg/mL) dodatnih 24 h.
2.3.2. Određivanje dušikovog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora nekroze tumora-α(TNF-α), i proizvodnja interleukina-6 (IL-6).
Stanice su tretirane sa SDE i stimulirane sa LPS 24 sata. Proizvodnja NO analizirana je mjerenjem nitrita pomoću Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Izlučivanje upalnih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen korištenjem ELISA kompleta (R&D sustavi) prema uputama proizvođača. Učinci SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm pomoću Wallac EnVision™čitač mikropločica (PerkinElmer).
2.4. Procjena aktivnosti antiosteoartritisaIn Vivo
2.4.1. Životinje
Muški štakori Sprague-Dawley (stari 7 tjedana) kupljeni su od Samtako Inc. (Osan, Koreja) i držani u kontroliranim uvjetima s 12-satnim ciklusom svjetlo/tama na°C i% vlažnosti. Štakori su dobili laboratorijsku hranu i voduad libitum. Svi eksperimentalni postupci provedeni su u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobreni od strane Odbora za brigu i korištenje životinja Sveučilišta Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).
2.4.2. Indukcija OA s MIA u štakora
Životinje su randomizirane i raspoređene u skupine za liječenje prije početka studije (po grupi). MIA otopina (3 mg/50μ1 0,9% fiziološke otopine) izravno je ubrizgan u intraartikularni prostor desnog koljena pod anestezijom induciranom mješavinom ketamina i ksilazina. Štakori su nasumično podijeljeni u četiri skupine: (1) skupina s fiziološkom otopinom bez injekcije MIA, (2) skupina s MIA s injekcijom MIA, (3) skupina liječena SDE (200 mg/kg) s injekcijom MIA i (4 ) skupina tretirana indometacinom (IM-) (2 mg/kg) s MIA injekcijom. Štakorima su davani oralno SDE i IM 1 tjedan prije MIA injekcije tijekom 4 tjedna. Doziranje SDE i IM korišteno u ovoj studiji temeljilo se na onima korištenim u prethodnim studijama [10,13,14].
2.4.3. Mjerenja raspodjele težine stražnje šape
Nakon indukcije OA, izvorna ravnoteža u sposobnosti nošenja težine stražnjih šapa bila je poremećena. Ispitivač nesposobnosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK) korišten je za procjenu promjena u toleranciji nošenja težine. Štakori su pažljivo stavljeni u mjernu komoru. Sila nošenja težine koju vrše stražnji ekstremiteti je prosječna tijekom razdoblja od 3 s. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednadžbom: [težina na desnom stražnjem ekstremitetu/(težina na desnom stražnjem ekstremitetu + težina na lijevom stražnjem ekstremitetu)] × 100 [15].
2.4.4. Mjerenja razine citokina u serumu
Uzorci krvi su centrifugirani na 1500 g tijekom 10 minuta na 4°C; zatim je serum sakupljen i pohranjen na -70°C do upotrebe. Razine IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu izmjereni su pomoću ELISA kitova tvrtke R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.
2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u stvarnom vremenu
Ukupna RNA ekstrahirana je iz tkiva zgloba koljena pomoću TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD), obrnuto transkribirana u cDNA i PCR-amplificirana pomoću TM One Step RT PCR kompleta sa SYBR zelenim (Applied Biosystems , Grand Island, NY, SAD). Kvantitativni PCR u stvarnom vremenu proveden je pomoću sustava Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Sekvence početnica i sekvence sonde prikazane su u tablici1. Alikvoti uzoraka cDNA i jednaka količina GAPDH cDNA umnoženi su TaqMan® Universal PCR glavnom smjesom koja sadrži DNA polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, CA, SAD). Uvjeti PCR bili su 2 minute na 50°C, 10 minuta na 94°C, 15 s na 95°C i 1 minuta na 60°C tijekom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena određena je pomoću usporedne metode Ct (broj ciklusa praga na križnoj točki između dijagrama pojačanja i praga), prema uputama proizvođača.
