-
Aromaterapija Čisto prirodno eterično ulje lista eukaliptusa za njegu kože tijela
Metoda ekstrakcije ili obrade: destilacija parom
Dio za ekstrakciju destilacije: list
Zemlja podrijetla: Kina
Primjena: Difuzno/aromaterapija/masaža
Rok trajanja: 3 godine
Prilagođena usluga: prilagođena naljepnica i kutija ili prema vašem zahtjevu
Certifikacija: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
Ulje eukaliptusa reagira sa sluzi i razrjeđuje je kako bi pružilo trenutno olakšanje od nedostatka daha i drugih respiratornih problema. Dovoljno je snažno da djeluje kao repelent protiv insekata. Kada se koristi u aromaterapiji, pruža jasnoću misli. Njegove terapijske koristi posljedica su antimikrobnih, antibakterijskih, antiseptičkih, antispazmodičnih i antivirusnih svojstava. Koristite ulje eukaliptusa protiv raznih kožnih i zdravstvenih stanja. Sadrži eukaliptol, poznat i kao cineol. Ovaj spoj podržat će vaše cjelokupno zdravlje i dobrobit.
-
Prirodno čisto organsko eterično ulje lavande za aromaterapijsku njegu kože
Metoda ekstrakcije ili obrade: Destilacija parom
Dio za ekstrakciju destilacije: Cvijet
Zemlja podrijetla: Kina
Primjena: Difuzno/aromaterapija/masaža
Rok trajanja: 3 godine
Prilagođena usluga: prilagođena naljepnica i kutija ili prema vašem zahtjevu
Certifikacija: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% čisto prirodno organsko eterično ulje Magnoliae Officmalis Cortex za njegu kože
Miris Hou Poa je odmah gorak i oštro oštar, a zatim se postupno otvara dubokom, sirupastom slatkoćom i toplinom.
Hou Po ima afinitet prema elementima Zemlje i Metala, gdje njegova gorka toplina snažno djeluje na spuštanje Qi energije i suhu vlagu. Zbog tih svojstava, koristi se u kineskoj medicini za ublažavanje stagnacije i nakupljanja u probavnom traktu, kao i kašljanja i zviždanja uzrokovanih sluzi koja začepljuje pluća.
Magnolia Officinials je listopadno drvo porijeklom iz planina i dolina Sečuana, Hubeija i drugih kineskih provincija. Visoko aromatična kora koja se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini ljušti se sa stabljika, grana i korijenja i bere se od travnja do lipnja. Debela, glatka kora, bogata uljem, ima ljubičastu boju s unutarnje strane i kristalni sjaj.
Praktičari mogu razmotriti kombiniranje Hou Poa s eteričnim uljem Qing Pi kao dodatak gornjoj noti u mješavinama usmjerenim na razbijanje nakupina.
-
OEM prilagođeni paket Prirodno ulje rizoma Macrocephalae
Kao učinkovito kemoterapijsko sredstvo, 5-fluorouracil (5-FU) se široko primjenjuje za liječenje malignih tumora u gastrointestinalnom traktu, glavi, vratu, prsima i jajnicima. 5-FU je lijek prve linije za kolorektalni karcinom u kliničkoj praksi. Mehanizam djelovanja 5-FU je blokiranje transformacije nukleinske kiseline uracila u nukleinsku kiselinu timina u tumorskim stanicama, a zatim utjecaj na sintezu i popravak DNA i RNA kako bi se postigao njegov citotoksični učinak (Afzal i sur., 2009.; Ducreux i sur., 2015.; Longley i sur., 2003.). Međutim, 5-FU također uzrokuje kemoterapijom inducirani proljev (CID), jednu od najčešćih nuspojava koja muči mnoge pacijente (Filho i sur., 2016.). Incidencija proljeva kod pacijenata liječenih 5-FU bila je do 50%–80%, što je ozbiljno utjecalo na napredak i učinkovitost kemoterapije (Iacovelli i sur., 2014.; Rosenoff i sur., 2006.). Stoga je od velike važnosti pronaći učinkovitu terapiju za CID izazvanu 5-FU.
Trenutno su u kliničko liječenje CID-a uvezene intervencije bez lijekova i intervencije lijekovima. Intervencije bez lijekova uključuju razumnu prehranu i dodatak soli, šećera i drugih hranjivih tvari. Lijekovi poput loperamida i oktreotida često se koriste u terapiji protiv proljeva kod CID-a (Benson i sur., 2004.). Osim toga, etnomedicina se također usvaja za liječenje CID-a sa svojom jedinstvenom terapijom u raznim zemljama. Tradicionalna kineska medicina (TCM) je tipična etnomedicina koja se primjenjuje više od 2000 godina u istočnoazijskim zemljama, uključujući Kinu, Japan i Koreju (Qi i sur., 2010.). TCM smatra da kemoterapijski lijekovi mogu izazvati potrošnju Qi-ja, nedostatak slezene, želučanu disharmoniju i endofitsku vlažnost, što rezultira provodnom disfunkcijom crijeva. U teoriji TCM-a, strategija liječenja CID-a trebala bi se uglavnom oslanjati na nadopunjavanje Qi-ja i jačanje slezene (Wang i sur., 1994.).
Osušeni korijeni odAtractylodes macrocephalaKoidz. (AM) iPanax ginsengCA Mey. (PG) su tipični biljni lijekovi u TCM-u s istim učincima nadopunjavanja Qi-ja i jačanja slezene (Li i sur., 2014.). AM i PG se obično koriste kao par biljaka (najjednostavniji oblik kineske biljne kompatibilnosti) s učincima nadopunjavanja Qi-ja i jačanja slezene za liječenje proljeva. Na primjer, AM i PG su dokumentirani u klasičnim formulama protiv proljeva kao što su Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang izTaiping Huimin Heji Ju Fang(dinastija Song, Kina) i Bu Zhong Yi Qi Tang izPi Wei Lun(Dinastija Yuan, Kina) (Sl. 1). Nekoliko prethodnih studija izvijestilo je da sve tri formule posjeduju sposobnost ublažavanja CID-a (Bai i sur., 2017.; Chen i sur., 2019.; Gou i sur., 2016.). Osim toga, naša prethodna studija pokazala je da Shenzhu kapsule koje sadrže samo AM i PG imaju potencijalne učinke na liječenje proljeva, kolitisa (xiexie sindroma) i drugih gastrointestinalnih bolesti (Feng i sur., 2018.). Međutim, nijedna studija nije raspravljala o učinku i mehanizmu AM i PG u liječenju CID-a, bilo u kombinaciji ili samostalno.
Sada se crijevna mikrobiota smatra potencijalnim čimbenikom u razumijevanju terapijskog mehanizma tradicionalne kineske medicine (TCM) (Feng i sur., 2019.). Moderne studije pokazuju da crijevna mikrobiota igra ključnu ulogu u održavanju crijevne homeostaze. Zdrava crijevna mikrobiota doprinosi zaštiti crijevne sluznice, metabolizmu, imunološkoj homeostazi i odgovoru te suzbijanju patogena (Thursby i Juge, 2017.; Pickard i sur., 2017.). Poremećena crijevna mikrobiota izravno ili neizravno narušava fiziološke i imunološke funkcije ljudskog tijela, izazivajući nuspojave poput proljeva (Patel i sur., 2016.; Zhao i Shen, 2010.). Istraživanja su pokazala da 5-FU značajno mijenja strukturu crijevne mikrobiote kod miševa s proljevom (Li i sur., 2017.). Stoga, učinci AM i PM na proljev izazvan 5-FU mogu biti posredovani crijevnom mikrobiotom. Međutim, još uvijek nije poznato mogu li AM i PG sami i u kombinaciji spriječiti proljev izazvan 5-FU moduliranjem crijevne mikrobiote.
Kako bismo istražili učinke protiv proljeva i temeljni mehanizam djelovanja AM i PG, koristili smo 5-FU za simulaciju modela proljeva kod miševa. Ovdje smo se usredotočili na potencijalne učinke pojedinačne i kombinirane primjene (AP)Atractylodes macrocephalaeterično ulje (AMO) iPanax ginsengukupnih saponina (PGS), aktivnih komponenti ekstrahiranih iz AM i PG, na proljev, crijevnu patologiju i mikrobnu strukturu nakon kemoterapije 5-FU.
-
100% čisto prirodno eterično ulje Eucommiae Foliuml za njegu kože
Eucommia ulmoides(EU) (u kineskom se obično naziva „Du Zhong“) pripada porodici Eucommiaceae, rodu malog drveta porijeklom iz središnje Kine [1]. Ova se biljka u Kini široko uzgaja u velikim razmjerima zbog svoje ljekovite važnosti. Iz EU je izolirano oko 112 spojeva, uključujući lignane, iridoide, fenole, steroide i druge spojeve. Komplementarna formula bilja ove biljke (poput ukusnog čaja) pokazala je neka ljekovita svojstva. List EU ima veću aktivnost u odnosu na korteks, cvijet i plod [2,3]. Izviješteno je da listovi EU poboljšavaju snagu kostiju i tjelesnih mišića [4], što dovodi do dugovječnosti i potiče plodnost kod ljudi [5]. Izviješteno je da ukusna formula čaja napravljena od lista EU smanjuje masnoću i poboljšava energetski metabolizam. Izviješteno je da flavonoidni spojevi (poput rutina, klorogene kiseline, ferulinske kiseline i kofeinske kiseline) pokazuju antioksidativno djelovanje u listovima EU [6].
Iako postoji dovoljno literature o fitokemijskim svojstvima EU, postoji malo studija o farmakološkim svojstvima različitih spojeva ekstrahiranih iz kore, sjemenki, stabljika i listova EU. Ovaj pregledni rad će objasniti detaljne informacije o različitim spojevima ekstrahiranim iz različitih dijelova (kore, sjemenki, stabljike i lista) EU i potencijalnoj upotrebi tih spojeva u svojstvima koja promiču zdravlje uz znanstvene dokaze te tako pružiti referentni materijal za primjenu EU.
-
Čisto prirodno ulje Houttuynia cordata, ulje Houttuynia cordata, ulje Lchthammolum
U većini zemalja u razvoju, 70-95% stanovništva oslanja se na tradicionalne lijekove za primarnu zdravstvenu zaštitu, a od toga 85% ljudi koristi biljke ili njihove ekstrakte kao aktivnu tvar.1Potraga za novim biološki aktivnim spojevima iz biljaka obično ovisi o specifičnim etničkim i narodnim informacijama dobivenim od lokalnih praktičara i još se uvijek smatra važnim izvorom za otkrivanje lijekova. U Indiji je otprilike 2000 lijekova biljnog podrijetla.[2S obzirom na široko rasprostranjeni interes za korištenje ljekovitog bilja, ovaj pregled oHouttuynia cordataThunb. pruža ažurne informacije s referencom na botaničke, komercijalne, etnofarmakološke, fitokemijske i farmakološke studije koje se pojavljuju u literaturi.H. cordataThunb. pripada obiteljiSaururaceaei općenito je poznat kao rep kineskog guštera. To je višegodišnja biljka sa stolonifernim rizomom koja ima dva različita kemotipa.[3,4Kineski kemotip vrste nalazi se u divljim i poludivljim uvjetima na sjeveroistoku Indije od travnja do rujna.[5,6,7]H. cordataDostupan je u Indiji, posebno u dolini Brahmaputra u Assamu, a tradicionalno ga koriste razna plemena Assama u obliku povrća, kao i u razne ljekovite svrhe.
-
100% čisto ulje Arctium lappa Proizvođač – Prirodno ulje Arctium lappa od limete s certifikatima o osiguranju kvalitete
Zdravstvene prednosti
Korijen čička se često jede, ali se može i sušiti i namakati u čaju. Dobro djeluje kao izvor inulina,prebiotikvlakna koja pomažu probavi i poboljšavaju zdravlje crijeva. Osim toga, ovaj korijen sadrži flavonoide (biljne hranjive tvari),fitokemikalije, i antioksidanse za koje se zna da imaju zdravstvene prednosti.
Osim toga, korijen čička može pružiti i druge koristi poput:
Smanjite kroničnu upalu Korijen čička sadrži niz antioksidansa, poput kvercetina, fenolnih kiselina i luteolina, koji mogu pomoći u zaštiti stanica odslobodni radikaliOvi antioksidansi pomažu u smanjenju upale u cijelom tijelu.
Zdravstveni rizici
Korijen čička smatra se sigurnim za jelo ili piće kao čaj. Međutim, ova biljka jako sliči biljci velebilje belladonna, koja je otrovna. Preporučuje se kupnja korijena čička samo od pouzdanih prodavača i suzdržavanje od samostalnog branja. Osim toga, postoje minimalne informacije o njegovim učincima na djecu ili trudnice. Posavjetujte se sa svojim liječnikom prije upotrebe korijena čička kod djece ili ako ste trudni.
Evo još nekih mogućih zdravstvenih rizika koje treba uzeti u obzir ako koristite korijen čička:
Povećana dehidracija
Korijen čička djeluje kao prirodni diuretik, što može dovesti do dehidracije. Ako uzimate tablete za izbacivanje vode ili druge diuretike, ne biste trebali uzimati korijen čička. Ako uzimate ove lijekove, važno je biti svjestan drugih lijekova, biljaka i sastojaka koji mogu dovesti do dehidracije.
Alergijska reakcija
Ako ste osjetljivi ili imate alergijske reakcije u anamnezi na tratinčice, ambroziju ili krizanteme, imate povećan rizik od alergijske reakcije na korijen čička.
-
Veleprodajna cijena 100% čistog ulja AsariRadix Et Rhizoma Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Studije na životinjama i in vitro studije istraživale su potencijalne antifungalne, protuupalne i kardiovaskularne učinke sasafrasa i njegovih komponenti. Međutim, klinička ispitivanja nedostaju, a sasafras se ne smatra sigurnim za upotrebu. Safrol, glavni sastojak kore i ulja korijena sasafrasa, zabranila je američka Agencija za hranu i lijekove (FDA), uključujući i za upotrebu kao aroma ili miris, te se ne smije koristiti interno ili eksterno, jer je potencijalno kancerogen. Safrol se koristio u ilegalnoj proizvodnji 3,4-metilen-dioksimetamfetamina (MDMA), poznatog i pod uličnim nazivima "ecstasy" ili "Molly", a prodaju safrola i ulja sasafrasa prati Američka agencija za suzbijanje droga.
-
Veleprodajna cijena 100% čisto eterično ulje Stellariae Radix (novo) Opuštajuća aromaterapija Eucalyptus globulus
Kineska farmakopeja (izdanje iz 2020.) zahtijeva da metanolni ekstrakt YCH ne smije biti manji od 20,0% [2], bez navedenih drugih pokazatelja ocjenjivanja kvalitete. Rezultati ove studije pokazuju da je sadržaj metanolnih ekstrakata divljih i kultiviranih uzoraka zadovoljavao farmakopejske standarde te da među njima nije bilo značajne razlike. Stoga, prema tom indeksu, nije bilo očite razlike u kvaliteti između divljih i kultiviranih uzoraka. Međutim, sadržaj ukupnih sterola i ukupnih flavonoida u divljim uzorcima bio je značajno veći od sadržaja u kultiviranim uzorcima. Daljnja metabolomska analiza otkrila je veliku raznolikost metabolita između divljih i kultiviranih uzoraka. Osim toga, isključeno je 97 značajno različitih metabolita, koji su navedeni uDodatna tablica S2Među tim značajno različitim metabolitima su β-sitosterol (ID je M397T42) i derivati kvercetina (M447T204_2), za koje je navedeno da su aktivni sastojci. Prethodno neprijavljeni sastojci, poput trigonelina (M138T291_2), betaina (M118T277_2), fustina (M269T36), rotenona (M241T189), arktina (M557T165) i loganične kiseline (M399T284_2), također su uključeni među diferencijalne metabolite. Ove komponente igraju različite uloge u antioksidaciji, protuupalnom djelovanju, uklanjanju slobodnih radikala, antikancerogenom djelovanju i liječenju ateroskleroze te bi stoga mogle predstavljati pretpostavljene nove aktivne komponente u YCH. Sadržaj aktivnih sastojaka određuje učinkovitost i kvalitetu ljekovitih materijala [7]. Ukratko, metanolni ekstrakt kao jedini indeks procjene kvalitete YCH-a ima neka ograničenja, a specifičnije markere kvalitete potrebno je dalje istražiti. Postojale su značajne razlike u ukupnim sterolima, ukupnim flavonoidima i sadržaju mnogih drugih diferencijalnih metabolita između divljeg i kultiviranog YCH-a; stoga su potencijalno postojale neke razlike u kvaliteti među njima. Istovremeno, novootkriveni potencijalni aktivni sastojci u YCH-u mogli bi imati važnu referentnu vrijednost za proučavanje funkcionalne osnove YCH-a i daljnji razvoj YCH resursa.
Važnost autentičnih ljekovitih materijala odavno je prepoznata u specifičnoj regiji podrijetla za proizvodnju kineskih biljnih lijekova izvrsne kvalitete [8]. Visoka kvaliteta je bitno svojstvo pravih ljekovitih materijala, a stanište je važan čimbenik koji utječe na kvalitetu takvih materijala. Otkad se YCH počeo koristiti kao lijek, dugo je dominirao divlji YCH. Nakon uspješnog uvođenja i pripitomljavanja YCH u Ningxiji 1980-ih, izvor ljekovitih materijala Yinchaihu postupno se prebacio s divljeg na kultivirani YCH. Prema prethodnom istraživanju izvora YCH [9] i terenskim istraživanjem naše istraživačke skupine, postoje značajne razlike u područjima rasprostranjenosti kultiviranog i divljeg ljekovitog materijala. Divlji YCH uglavnom je rasprostranjen u autonomnoj regiji Ningxia Hui u provinciji Shaanxi, uz aridnu zonu Unutarnje Mongolije i središnjeg Ningxia. Posebno je pustinjska stepa u tim područjima najpogodnije stanište za rast YCH. Nasuprot tome, kultivirani YCH uglavnom je rasprostranjen južno od područja divljeg rasprostranjenja, kao što je okrug Tongxin (kultivirani I) i okolna područja, koji je postao najveća baza za uzgoj i proizvodnju u Kini, te okrug Pengyang (kultivirani II), koji se nalazi u južnijem području i još jedno je područje proizvodnje kultiviranog YCH. Štoviše, staništa gore navedena dva kultivirana područja nisu pustinjska stepa. Stoga, osim načina proizvodnje, postoje i značajne razlike u staništu divljeg i kultiviranog YCH. Stanište je važan čimbenik koji utječe na kvalitetu biljnih ljekovitih materijala. Različita staništa utjecat će na stvaranje i akumulaciju sekundarnih metabolita u biljkama, što će utjecati na kvalitetu ljekovitih proizvoda [10,11Stoga bi značajne razlike u sadržaju ukupnih flavonoida i ukupnih sterola te ekspresiji 53 metabolita koje smo pronašli u ovoj studiji mogle biti rezultat upravljanja poljem i razlika u staništima.Jedan od glavnih načina na koji okoliš utječe na kvalitetu ljekovitog materijala jest stres na izvorne biljke. Umjereni stres iz okoliša obično potiče nakupljanje sekundarnih metabolita [12,13]. Hipoteza o ravnoteži rasta/diferencijacije tvrdi da, kada su hranjive tvari u dovoljnoj količini, biljke prvenstveno rastu, dok kada su hranjive tvari manjkave, biljke se uglavnom diferenciraju i proizvode više sekundarnih metabolita [14]. Stres od suše uzrokovan nedostatkom vode glavni je okolišni stres s kojim se suočavaju biljke u sušnim područjima. U ovoj studiji, vodni uvjeti kultiviranog YCH-a su obilniji, s godišnjim razinama oborina znatno višim od onih za divlji YCH (opskrba vodom za kultivirani I bila je oko 2 puta veća od divljeg; kultivirani II bila je oko 3,5 puta veća od divljeg). Osim toga, tlo u divljem okruženju je pjeskovito tlo, ali tlo na poljoprivrednom zemljištu je glinovito tlo. U usporedbi s glinom, pjeskovito tlo ima slab kapacitet zadržavanja vode i vjerojatnije je da će pogoršati stres od suše. Istodobno, proces uzgoja često je bio popraćen zalijevanjem, pa je stupanj stresa od suše bio nizak. Divlji YCH raste u surovim prirodnim sušnim staništima i stoga može patiti od ozbiljnijeg stresa od suše.Osmoregulacija je važan fiziološki mehanizam kojim se biljke nose sa stresom suše, a alkaloidi su važni osmotski regulatori u višim biljkama [15Betaini su u vodi topljivi alkaloidni kvaternarni amonijevi spojevi i mogu djelovati kao osmoprotektanti. Stres suše može smanjiti osmotski potencijal stanica, dok osmoprotektanti čuvaju i održavaju strukturu i integritet bioloških makromolekula te učinkovito ublažavaju štetu uzrokovanu stresom suše na biljkama [16]. Na primjer, pod stresom suše, sadržaj betaina u šećernoj repi i Lycium barbarum značajno se povećao [17,18Trigonelin je regulator rasta stanica, a pod stresom suše može produžiti duljinu staničnog ciklusa biljke, inhibirati rast stanica i dovesti do smanjenja volumena stanica. Relativno povećanje koncentracije otopljene tvari u stanici omogućuje biljci postizanje osmotske regulacije i poboljšanje njezine sposobnosti da se odupre stresu suše [19]. JIA X [20] otkrili su da s povećanjem stresa uzrokovanog sušom, Astragalus membranaceus (izvor tradicionalne kineske medicine) proizvodi više trigonelina, koji djeluje na regulaciju osmotičkog potencijala i poboljšava sposobnost otpora stresu uzrokovanom sušom. Također je dokazano da flavonoidi igraju važnu ulogu u otpornosti biljaka na stres uzrokovan sušom [21,22]. Veliki broj studija potvrdio je da je umjereni stres uzrokovan sušom pogodovao nakupljanju flavonoida. Lang Duo-Yong i sur. [23] usporedili su učinke stresa suše na YCH kontroliranjem kapaciteta zadržavanja vode u polju. Utvrđeno je da stres suše do određene mjere inhibira rast korijena, ali kod umjerenog i jakog stresa suše (40% kapaciteta zadržavanja vode u polju), ukupni sadržaj flavonoida u YCH se povećao. U međuvremenu, pod stresom suše, fitosteroli mogu djelovati na regulaciju fluidnosti i propusnosti stanične membrane, inhibirati gubitak vode i poboljšati otpornost na stres [24,25Stoga bi povećana akumulacija ukupnih flavonoida, ukupnih sterola, betaina, trigonelina i drugih sekundarnih metabolita u divljem YCH mogla biti povezana sa stresom suše visokog intenziteta.U ovoj studiji provedena je analiza obogaćivanja KEGG puta na metabolitima za koje je utvrđeno da se značajno razlikuju između divljeg i kultiviranog YCH. Obogaćeni metaboliti uključivali su one uključene u putove metabolizma askorbata i aldarata, biosintezu aminoacil-tRNA, metabolizam histidina i metabolizam beta-alanina. Ovi metabolički putovi usko su povezani s mehanizmima otpornosti biljaka na stres. Među njima, metabolizam askorbata igra važnu ulogu u proizvodnji biljnih antioksidansa, metabolizmu ugljika i dušika, otpornosti na stres i drugim fiziološkim funkcijama [26]; biosinteza aminoacil-tRNA važan je put za stvaranje proteina [27,28], koji je uključen u sintezu proteina otpornih na stres. I histidinski i β-alaninski putevi mogu poboljšati toleranciju biljaka na stres iz okoliša [29,30]. To dodatno ukazuje na to da su razlike u metabolitima između divljeg i kultiviranog YCH bile usko povezane s procesima otpornosti na stres.Tlo je materijalna osnova za rast i razvoj ljekovitih biljaka. Dušik (N), fosfor (P) i kalij (K) u tlu važni su hranjivi elementi za rast i razvoj biljaka. Organska tvar tla također sadrži N, P, K, Zn, Ca, Mg i druge makroelemente i elemente u tragovima potrebne za ljekovite biljke. Prekomjerne ili manjkave hranjive tvari, ili neuravnoteženi omjeri hranjivih tvari, utjecat će na rast i razvoj te kvalitetu ljekovitog materijala, a različite biljke imaju različite potrebe za hranjivim tvarima [31,32,33]. Na primjer, nizak N stres potaknuo je sintezu alkaloida kod Isatis indigotica i bio je koristan za akumulaciju flavonoida u biljkama kao što su Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge i Dichondra repens Forst. Nasuprot tome, previše N inhibiralo je akumulaciju flavonoida kod vrsta kao što su Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis i Ginkgo biloba te utjecalo na kvalitetu ljekovitih materijala [34]. Primjena fosfornog gnojiva bila je učinkovita u povećanju sadržaja glicirizinske kiseline i dihidroacetona u uralskom sladiću [35]. Kada je primijenjena količina premašila 0,12 kg·m−2, ukupni sadržaj flavonoida u Tussilago farfara se smanjio [36]. Primjena fosfornog gnojiva negativno je utjecala na sadržaj polisaharida u tradicionalnoj kineskoj medicini, vrsti rhizoma polygonati [37], ali K gnojivo je bilo učinkovito u povećanju sadržaja saponina [38]. Primjena 450 kg·hm−2 K gnojiva bila je najbolja za rast i akumulaciju saponina dvogodišnje biljke Panax notoginseng [39]. Pri omjeru N:P:K = 2:2:1, ukupne količine hidrotermalnog ekstrakta, harpagida i harpagozida bile su najveće [40Visok omjer N, P i K bio je koristan za poticanje rasta Pogostemon cablin i povećanje sadržaja hlapljivog ulja. Nizak omjer N, P i K povećao je sadržaj glavnih učinkovitih komponenti ulja stabljike lista Pogostemon cablin [41]. YCH je biljka otporna na neplodno tlo i mogla bi imati specifične zahtjeve za hranjivim tvarima poput N, P i K. U ovoj studiji, u usporedbi s kultiviranim YCH, tlo divljih biljaka YCH bilo je relativno neplodno: sadržaj organske tvari u tlu, ukupni N, ukupni P i ukupni K bili su oko 1/10, 1/2, 1/3 i 1/3 sadržaja kultiviranih biljaka. Stoga bi razlike u hranjivim tvarima u tlu mogle biti još jedan razlog za razlike između metabolita otkrivenih u kultiviranom i divljem YCH. Weibao Ma i sur. [42] utvrdili su da primjena određene količine N gnojiva i P gnojiva značajno poboljšava prinos i kvalitetu sjemena. Međutim, utjecaj hranjivih elemenata na kvalitetu YCH nije jasan, a mjere gnojidbe za poboljšanje kvalitete ljekovitog materijala zahtijevaju daljnja istraživanja.Kineski biljni lijekovi imaju karakteristike „Povoljna staništa potiču prinos, a nepovoljna staništa poboljšavaju kvalitetu“ [43U procesu postupnog prelaska s divljeg na kultivirani YCH, stanište biljaka promijenilo se iz sušne i neplodne pustinjske stepe u plodno poljoprivredno zemljište s obilnijom vodom. Stanište kultiviranog YCH je superiornije, a prinos veći, što pomaže u zadovoljavanju tržišne potražnje. Međutim, ovo superiorno stanište dovelo je do značajnih promjena u metabolitima YCH; je li to pogodno za poboljšanje kvalitete YCH i kako postići visokokvalitetnu proizvodnju YCH putem znanstveno utemeljenih mjera uzgoja zahtijevat će daljnja istraživanja.Simulativni uzgoj staništa je metoda simuliranja stanišnih i okolišnih uvjeta divljih ljekovitih biljaka, temeljena na poznavanju dugoročne prilagodbe biljaka specifičnim okolišnim stresovima [43Simuliranjem različitih okolišnih čimbenika koji utječu na divlje biljke, posebno izvorno stanište biljaka korištenih kao izvori autentičnih ljekovitih materijala, pristup koristi znanstveni dizajn i inovativnu ljudsku intervenciju kako bi uravnotežio rast i sekundarni metabolizam kineskih ljekovitih biljaka [43]. Metode imaju za cilj postizanje optimalnih aranžmana za razvoj visokokvalitetnih ljekovitih materijala. Simulativni uzgoj staništa trebao bi osigurati učinkovit način za visokokvalitetnu proizvodnju YCH-a čak i kada su farmakodinamička osnova, markeri kvalitete i mehanizmi odgovora na čimbenike okoliša nejasni. Sukladno tome, predlažemo da se znanstveni dizajn i mjere upravljanja poljem u uzgoju i proizvodnji YCH-a provode uzimajući u obzir okolišne karakteristike divljeg YCH-a, kao što su sušna, neplodna i pjeskovita tla. Istovremeno, nadamo se da će istraživači provesti dublja istraživanja o funkcionalnoj materijalnoj osnovi i markerima kvalitete YCH-a. Ove studije mogu pružiti učinkovitije kriterije za procjenu YCH-a te promovirati visokokvalitetnu proizvodnju i održivi razvoj industrije. -
Biljno ulje Fructus Amomi Prirodni masažni difuzori 1 kg u rinfuzi Eterično ulje Amomum villosum
Obitelj Zingiberaceae privlači sve veću pozornost u alelopatnim istraživanjima zbog bogatstva hlapljivim uljima i aromatičnosti svojih vrsta. Prethodna istraživanja pokazala su da kemikalije iz Curcuma zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] i Zingiber officinale Rosc. [42] iz porodice đumbira imaju alelopatne učinke na klijanje sjemena i rast sadnica kukuruza, salate i rajčice. Naša trenutna studija prvo je izvješće o alelopatnoj aktivnosti hlapljivih tvari iz stabljika, listova i mladih plodova A. villosum (član porodice Zingiberaceae). Prinos ulja iz stabljika, listova i mladih plodova bio je 0,15%, 0,40% i 0,50%, što ukazuje na to da su plodovi proizveli veću količinu hlapljivih ulja od stabljika i listova. Glavne komponente hlapljivih ulja iz stabljika bile su β-pinen, β-felandren i α-pinen, što je bio obrazac sličan onome glavnih kemikalija ulja lista, β-pinena i α-pinena (monoterpenski ugljikovodici). S druge strane, ulje u mladim plodovima bilo je bogato bornil acetatom i kamforom (oksigenirani monoterpeni). Rezultate su potvrdili nalazi Do N Daija [30,32] i Hui Ao [31] koji su identificirali ulja iz različitih organa A. villosum.
Postoji nekoliko izvješća o inhibitornim aktivnostima ovih glavnih spojeva na rast biljaka kod drugih vrsta. Shalinder Kaur je otkrila da α-pinen iz eukaliptusa značajno suzbija duljinu korijena i visinu izdanka Amaranthus viridis L. pri koncentraciji od 1,0 μL [43], a druga studija pokazala je da α-pinen inhibira rani rast korijena i uzrokuje oksidativna oštećenja u tkivu korijena povećanim stvaranjem reaktivnih vrsta kisika [44]. Neka izvješća tvrde da je β-pinen inhibirao klijanje i rast sadnica testnih korova na način ovisan o dozi narušavajući integritet membrane [45], mijenjajući biokemiju biljaka i pojačavajući aktivnost peroksidaza i polifenol oksidaza [46]. β-Phelandren je pokazao maksimalnu inhibiciju klijanja i rasta Vigna unguiculata (L.) Walp pri koncentraciji od 600 ppm [47], dok je pri koncentraciji od 250 mg/m3 kamfor suzbijao rast radikula i izdanka Lepidium sativum L. [48]. Međutim, istraživanja koja izvještavaju o alelopatnom učinku bornil acetata su oskudna. U našoj studiji, alelopatni učinci β-pinena, bornil acetata i kamfora na duljinu korijena bili su slabiji nego za hlapljiva ulja, osim za α-pinen, dok je ulje lista, bogato α-pinenom, također bilo fitotoksičnije od odgovarajućih hlapljivih ulja iz stabljika i plodova A. villosum, a oba nalaza ukazuju na to da bi α-pinen mogao biti važna kemikalija za alelopatiju ove vrste. Istovremeno, rezultati su također implicirali da neki spojevi u ulju ploda koji nisu bili obilni mogu doprinijeti nastanku fitotoksičnog učinka, što je nalaz koji zahtijeva daljnja istraživanja u budućnosti.U normalnim uvjetima, alelopatski učinak alelokemikalija je specifičan za vrstu. Jiang i suradnici otkrili su da eterično ulje koje proizvodi Artemisia sieversiana ima jači učinak na Amaranthus retroflexus L. nego na Medicago sativa L., Poa annua L. i Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng.49U drugoj studiji, hlapljivo ulje Lavandula angustifolia Mill. proizvelo je različite stupnjeve fitotoksičnih učinaka na različite biljne vrste. Lolium multiflorum Lam. bio je najosjetljivija akceptorska vrsta, rast hipokotila i radikula bio je inhibiran za 87,8% odnosno 76,7% pri dozi od 1 μL/mL ulja, ali rast hipokotila sadnica krastavca bio je jedva pogođen [20Naši rezultati su također pokazali da postoji razlika u osjetljivosti na hlapljive tvari A. villosum između L. sativa i L. perenne.Hlapljivi spojevi i eterična ulja iste vrste mogu se kvantitativno i/ili kvalitativno razlikovati zbog uvjeta rasta, dijelova biljke i metoda detekcije. Na primjer, jedno izvješće pokazalo je da su piranoid (10,3%) i β-kariofilen (6,6%) bili glavni spojevi hlapljivih tvari emitiranih iz listova Sambucus nigra, dok su benzaldehid (17,8%), α-bulnesen (16,6%) i tetrakosan (11,5%) bili obilni u uljima ekstrahiranim iz listova [50U našoj studiji, hlapljivi spojevi koje su otpuštali svježi biljni materijali imali su jače alelopatne učinke na testne biljke nego ekstrahirana hlapljiva ulja, a razlike u odgovoru usko su povezane s razlikama u alelokemikalijama prisutnim u dva pripravka. Točne razlike između hlapljivih spojeva i ulja potrebno je dalje istražiti u sljedećim eksperimentima.Razlike u mikrobnoj raznolikosti i strukturi mikrobne zajednice u uzorcima tla kojima su dodana hlapljiva ulja bile su povezane s konkurencijom među mikroorganizmima, kao i s bilo kakvim toksičnim učincima i trajanjem hlapljivih ulja u tlu. Vokou i Liotiri [51] utvrdili su da je primjena četiriju eteričnih ulja (0,1 mL) na obrađeno tlo (150 g) aktivirala disanje uzoraka tla, čak su se ulja razlikovala po kemijskom sastavu, što sugerira da mikroorganizmi u tlu koriste biljna ulja kao izvor ugljika i energije. Podaci dobiveni iz ove studije potvrdili su da su ulja iz cijele biljke A. villosum doprinijela očiglednom povećanju broja vrsta gljivica u tlu do 14. dana nakon dodavanja ulja, što ukazuje na to da ulje može biti izvor ugljika za više gljivica u tlu. Druga studija izvijestila je o nalazu: mikroorganizmi u tlu oporavili su svoju početnu funkciju i biomasu nakon privremenog razdoblja varijacije izazvanog dodavanjem ulja Thymbra capitata L. (Cav), ali ulje u najvećoj dozi (0,93 µL ulja po gramu tla) nije dopustilo mikroorganizmima u tlu da oporave početnu funkcionalnost [52]. U trenutnoj studiji, na temelju mikrobiološke analize tla nakon tretmana različitim danima i koncentracijama, pretpostavili smo da će se bakterijska zajednica tla oporaviti nakon više dana. Nasuprot tome, gljivična mikrobiota ne može se vratiti u prvobitno stanje. Sljedeći rezultati potvrđuju ovu hipotezu: analiza glavnih koordinata (PCoA) otkrila je izrazit učinak visoke koncentracije ulja na sastav gljivičnog mikrobioma tla, a prikazi toplinske karte ponovno su potvrdili da se sastav gljivične zajednice tla tretiranog s 3,0 mg/mL ulja (naime 0,375 mg ulja po gramu tla) na razini roda znatno razlikuje od ostalih tretmana. Trenutno su istraživanja o učincima dodavanja monoterpenskih ugljikovodika ili oksigeniranih monoterpena na mikrobnu raznolikost tla i strukturu zajednice još uvijek oskudna. Nekoliko studija izvijestilo je da α-pinen povećava mikrobnu aktivnost tla i relativnu brojnost Methylophilaceae (skupina metilotrofa, Proteobacteria) pri niskom sadržaju vlage, igrajući važnu ulogu kao izvor ugljika u sušim tlima [53]. Slično tome, hlapljivo ulje cijele biljke A. villosum, koje sadrži 15,03% α-pinena (Dodatna tablica S1), očito je povećao relativnu brojnost Proteobakterija na 1,5 mg/mL i 3,0 mg/mL, što sugerira da α-pinen moguće djeluje kao jedan od izvora ugljika za mikroorganizme u tlu.Hlapljivi spojevi koje proizvode različiti organi A. villosum imali su različite stupnjeve alelopatnih učinaka na L. sativa i L. perenne, što je bilo usko povezano s kemijskim sastojcima koje su sadržavali dijelovi biljke A. villosum. Iako je kemijski sastav hlapljivog ulja potvrđen, hlapljivi spojevi koje oslobađa A. villosum na sobnoj temperaturi nisu poznati, što zahtijeva daljnja istraživanja. Štoviše, vrijedan je razmatranja i sinergijski učinak između različitih alelokemikalija. Što se tiče mikroorganizama u tlu, kako bismo sveobuhvatno istražili učinak hlapljivog ulja na mikroorganizme u tlu, još uvijek moramo provesti dublja istraživanja: produžiti vrijeme tretmana hlapljivim uljem i uočiti varijacije u kemijskom sastavu hlapljivog ulja u tlu tijekom različitih dana. -
Čisto ulje Artemisia capillaris za izradu svijeća i sapuna, veleprodaja, difuzor, novo eterično ulje za difuzore s trstičnim plamenikom
Dizajn modela glodavaca
Životinje su nasumično podijeljene u pet skupina od po petnaest miševa. Miševi kontrolne skupine i modelne skupine primali su sondu ssezamovo uljetijekom 6 dana. Miševi pozitivne kontrolne skupine dobivali su tablete bifendata (BT, 10 mg/kg) putem sonde tijekom 6 dana. Eksperimentalne skupine tretirane su sa 100 mg/kg i 50 mg/kg AEO otopljenog u sezamovom ulju tijekom 6 dana. Šestog dana kontrolna skupina tretirana je sezamovim uljem, a sve ostale skupine tretirane su jednom dozom 0,2% CCl4 u sezamovom ulju (10 ml/kg) do...intraperitonealna injekcijaMiševi su zatim natašteni bez vode, a uzorci krvi su uzeti iz retrobulbarnih žila; prikupljena krv je centrifugirana pri 3000 ×g10 minuta kako bi se odvojio serum.Dislokacija vratne kralježniceprovedeno je odmah nakon vađenja krvi, a uzorci jetre su odmah uklonjeni. Jedan dio uzorka jetre odmah je pohranjen na -20 °C do analize, a drugi dio je izrezan i fiksiran u 10%formalinotopina; preostala tkiva su pohranjena na -80 °C za histopatološku analizu (Wang i sur., 2008.,Hsu i sur., 2009.,Nie i sur., 2015.).
Mjerenje biokemijskih parametara u serumu
Oštećenje jetre procijenjeno je procjenomenzimske aktivnostiserumske ALT i AST pomoću odgovarajućih komercijalnih kitova prema uputama za kitove (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Enzimske aktivnosti izražene su u jedinicama po litri (U/l).
Mjerenje MDA, SOD, GSH i GSH-Pxu homogenatima jetre
Tkiva jetre homogenizirana su hladnom fiziološkom otopinom u omjeru 1:9 (w/v, jetra:fiziološka otopina). Homogenati su centrifugirani (2500 ×gtijekom 10 minuta) kako bi se prikupili supernatanti za naknadna određivanja. Oštećenje jetre procijenjeno je prema mjerenjima razine MDA i GSH u jetri, kao i SOD i GSH-P.xaktivnosti. Sve su to određene prema uputama na kompletu (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Rezultati za MDA i GSH izraženi su kao nmol po mg proteina (nmol/mg prot), a aktivnosti SOD i GSH-Pxizraženi su kao U po mg proteina (U/mg prot).
Histopatološka analiza
Dijelovi svježe dobivene jetre fiksirani su u 10% puferiranojparaformaldehidotopina fosfata. Uzorak je zatim ugrađen u parafin, narezan na dijelove od 3–5 μm, obojen shematoksilinieozin(H&E) prema standardnom postupku, a na kraju analizirano od stranesvjetlosna mikroskopija(Tian i sur., 2012.).
Statistička analiza
Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Rezultati su analizirani pomoću statističkog programa SPSS Statistics, verzija 19.0. Podaci su podvrgnuti analizi varijance (ANOVA,p< 0,05) nakon čega su korišteni Dunnettov test i Dunnettov T3 test kako bi se utvrdile statistički značajne razlike između vrijednosti različitih eksperimentalnih skupina. Značajna razlika smatrana je na razinip< 0,05.
Rezultati i rasprava
Sastavni dijelovi AEO-a
Nakon GC/MS analize, utvrđeno je da AEO sadrži 25 sastojaka eluiranih od 10 do 35 minuta, a identificiran je 21 sastojak koji čini 84% eteričnog ulja (Tablica 1). Hlapljivo ulje sadržanomonoterpenoidi(80,9%), seskviterpenoidi (9,5%), zasićeni nerazgranati ugljikovodici (4,86%) i razni acetilen (4,86%). U usporedbi s drugim studijama (Guo i sur., 2004.), pronašli smo obilne monoterpenoide (80,90%) u AEO-u. Rezultati su pokazali da je najzastupljeniji sastojak AEO-a β-citronelol (16,23%). Ostali glavni sastojci AEO-a uključuju 1,8-cineol (13,9%),kamfor(12,59%),linalol(11,33%), α-pinen (7,21%), β-pinen (3,99%),timol(3,22%), imircen(2,02%). Varijacija u kemijskom sastavu može biti povezana s uvjetima okoline kojima je biljka bila izložena, kao što su mineralna voda, sunčeva svjetlost, faza razvoja iprehrana.
-
Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za izradu svijeća i sapuna, veleprodaja, eterično ulje za difuzore, novo za difuzore s trstičnim plamenikom
2.1. Priprema SDE-a
Rizomi SD-a kupljeni su kao sušena biljka od tvrtke Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljni materijal taksonomski je potvrdio dr. Go-Ya Choi iz Korejskog instituta za orijentalnu medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) pohranjen je u Korejskom herbariju standardnih biljnih resursa. Osušeni rizomi SD-a (320 g) ekstrahirani su dva puta sa 70%-tnim etanolom (uz 2 sata refluksa), a ekstrakt je zatim koncentriran pod smanjenim tlakom. Dekokt je filtriran, liofiliziran i pohranjen na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih početnih materijala bio je 48,13% (w/w).
2.2. Kvantitativna analiza visokoučinkovitom tekućinskom kromatografijom (HPLC)
Kromatografska analiza provedena je HPLC sustavom (Waters Co., Milford, MA, SAD) i detektorom s fotodiodnim nizom. Za HPLC analizu SDE-a, primarni...O-glukozilcimifugin standard je kupljen od Korejskog instituta za promociju tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja), isec-O-glukozilhamaudol i 4'-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol su izolirani u našem laboratoriju i identificirani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.
Uzorci SDE (0,1 mg) otopljeni su u 70%-tnom etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje provedeno je s kolonom XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza sastojala se od acetonitrila (A) i 0,1% octene kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je višestupanjski gradijentni program kako slijedi: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min). Valna duljina detekcije skenirana je na 210–400 nm i zabilježena na 254 nm. Volumen ubrizgavanja bio je 10,0μL. Standardne otopine za određivanje tri kromona pripremljene su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4'-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) i 31,125 mg/mL (sec-O-glukozilhamaudol) u metanolu i čuvan na 4°C.
2.3. Evaluacija protuupalnog djelovanjaIn vitro
2.3.1. Stanična kultura i obrada uzoraka
Stanice RAW 264.7 dobivene su iz Američke kolekcije tipskih kultura (ATCC, Manassas, VA, SAD) i uzgojene u DMEM mediju koji sadrži 1% antibiotika i 5,5% FBS-a. Stanice su inkubirane u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 na 37°C. Za stimulaciju stanica, medij je zamijenjen svježim DMEM medijem i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SAD) na 1μg/mL je dodan u prisutnosti ili odsutnosti SDE (200 ili 400μg/mL) tijekom dodatnih 24 sata.
2.3.2. Određivanje dušikovog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora tumorske nekrozeα(TNF-α) i proizvodnju interleukina-6 (IL-6)
Stanice su tretirane SDE-om i stimulirane LPS-om tijekom 24 sata. Produkcija NO analizirana je mjerenjem nitrita pomoću Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Izlučivanje upalnih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen pomoću ELISA kita (R&D systems) prema uputama proizvođača. Učinci SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm pomoću Wallac EnVision uređaja.™čitač mikroploča (PerkinElmer).
2.4. Evaluacija antiosteoartritične aktivnostiIn vivo
2.4.1. Životinje
Mužjaci štakora Sprague-Dawley (stari 7 tjedana) kupljeni su od tvrtke Samtako Inc. (Osan, Koreja) i smješteni u kontroliranim uvjetima s 12-satnim ciklusom svjetla/tame pri°C i% vlažnosti. Štakorima je dana laboratorijska prehrana i vodapo voljiSvi eksperimentalni postupci provedeni su u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobreni od strane Odbora za njegu i korištenje životinja Sveučilišta Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).
2.4.2. Indukcija OA s MIA u štakora
Životinje su randomizirane i raspoređene u skupine za liječenje prije početka studije (po skupini). Otopina MIA (3 mg/50μ1 l 0,9%-tne fiziološke otopine) izravno je ubrizgan u intraartikularni prostor desnog koljena pod anestezijom induciranom smjesom ketamina i ksilazina. Štakori su nasumično podijeljeni u četiri skupine: (1) skupina s fiziološkom otopinom bez injekcije MIA, (2) skupina s MIA injekcijom, (3) skupina tretirana SDE-om (200 mg/kg) s injekcijom MIA i (4) skupina tretirana indometacinom (IM) (2 mg/kg) s injekcijom MIA. Štakorima je oralno davan SDE i IM 1 tjedan prije injekcije MIA tijekom 4 tjedna. Doziranje SDE i IM korišteno u ovoj studiji temeljilo se na onima korištenima u prethodnim studijama [10,13,14].
2.4.3. Mjerenja raspodjele težine stražnjih šapa
Nakon indukcije osteoartritisa (OA), izvorna ravnoteža u sposobnosti nošenja težine stražnjih šapa bila je poremećena. Za procjenu promjena u toleranciji nošenja težine korišten je tester onesposobljenosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK). Štakori su pažljivo smješteni u mjernu komoru. Sila nošenja težine koju vrši stražnji ud usrednjena je tijekom razdoblja od 3 sekunde. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednadžbom: [težina na desnom stražnjem udu / (težina na desnom stražnjem udu + težina na lijevom stražnjem udu)] × 100 [15].
2.4.4. Mjerenja razine citokina u serumu
Uzorci krvi su centrifugirani pri 1500 g tijekom 10 minuta na 4 °C; zatim je serum sakupljen i pohranjen na -70 °C do upotrebe. Razine IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu mjereni su pomoću ELISA kitova tvrtke R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.
2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u stvarnom vremenu
Ukupna RNA ekstrahirana je iz tkiva koljenskog zgloba pomoću TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD), reverzno transkribirana u cDNA i PCR-amplificirana pomoću TM One Step RT PCR kita sa SYBR green bojom (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Kvantitativna PCR u stvarnom vremenu provedena je pomoću Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sustava (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Sekvence primera i sekvenca sonde prikazane su u Tablici1Alikvoti uzoraka cDNA i jednaka količina GAPDH cDNA amplificirani su s TaqMan® Universal PCR master smjesom koja sadrži DNA polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, CA, SAD). Uvjeti PCR-a bili su 2 min na 50°C, 10 min na 94°C, 15 s na 95°C i 1 min na 60°C tijekom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena određena je korištenjem metode usporedne Ct (broj ciklusa praga na točki križanja između amplifikacijskog dijagrama i praga), prema uputama proizvođača.
